山东省无花果种资源遗传多样性评价及品种鉴定研究.pdfVIP

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山东省无花果种资源遗传多样性评价及品种鉴定研究

lllj JIIIIIIlllllllllllllllllllllllllllllll Y2332667 目 录 摘要…………………………………………………………………………………………………………………………………………..i Abstract……………………………………….……………………………………………………………………………………………III 英文缩写词表……………………………………………………………………………………………一v 前言…………………………………………………………………………………………………………………………………1 材料与方法……………………………………………一.-.…………………………………………………10 1材料………………………………………………………………………………………………………………………………………..10 2方法………………………………………………………………………………………………………………………………………..10 2.1种质资源的搜集与保存……………………………………………………………………………….10 2.2基因组DNA提取………………………………………………………………………………………11 2.3RAPD.PCR扩增及产物鉴定…………………………………………………………………………12 2.4RAPD多样性数据统计与分析……………………………………………………………………….12 2.5RAPD标记向SCAR标记的转换……………………………………………………………………12 2.5.1琼脂糖凝胶上RAPD标记片段的回收…………………………………………………………….12 2.5.2重组质粒的构建…………………………………………………………………………………….13 2.5.3大肠杆菌DH50t感受态细胞的制备………………………………………………………………..13 2.5.4重组质粒转化感受态细胞…………………………………………………………………。………13 2.5.5提取质粒DNA………………………………………………………………………………………14 2.5.6重组质粒的酶切鉴定………………………………………………………………………………。14 2.5.7目的片段的测序……………………………………………………………………………………………15 2.5.8 SCAR引物设计及反应条什优化………………………………………………………r..…………15 2.6无花果I铺种的RAPD指纹鉴定………………………………………………………………………15 2.7无花果品种的SSR指纹鉴定…………………………………………………………………………l5 2.7.1SSR引物合成及PCR扩增…………………………………………………………………………15 2.7.2 SSR扩增结果的变性聚丙烯酰胺凝胶IU泳………………………………………………………..15 结果与分析………………………………………………………………………………………………一17 2无化果III.J髟’IJ:lJtRAPD标记……………………………………………………………………………I8 3RAPD标记片段的FI收、克隆及酶叨鉴定……………………………………………………………l9 4特异片段的测序及分析…………………………………………………………………………………22 5RAPD向SCAR标记的转换……………………………………………………………………………24 6无花果品种RAPD指纹鉴定…………………….:…………………………………………………….25 7无花果品种SSR指纹鉴定……………………………………………………………………………..27 讨 论……………………………………………………………………………………………………………………………………….29 1关于山东省无花果资源多样性问题……………………………………………………………………29 2关于无花果叶形标记的问题……………………………………………………………………………30

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