香菇种质资源的别及保藏方法的研究.pdf

香菇种质资源的鉴别及保藏方法的研究 摘要 目前香菇菌种市场比较混乱，菌种管理比较滞后，乱引种、乱命名比较普遍， 导致同名异物或同物异名现象比较严重，不利于香菇品种间遗传多样性的客观揭 示。香菇菌种鉴定的研究，对菌种资源保护，防止菌种退化具有十分重要的意义。 本文在参考国内外相关资料基础上，结合DNA分子标记和拮抗实验进行了这方面 研究。 本文采用ITS—PCR扩增对提取得136个香菇栽培种进行DNA提取的验证，成 功筛选了8对SCAR引物，在SCAR引物验证中，均表现出多态性谱带。通过8 个SCAR分子标记把136个栽培香菇种进行了亲缘关系和聚类分析，结果分成了 49类，其中复合类20类，单个类29类。拮抗实验是在分子聚类的基础上进行 的，分为三种情况进行，它们是：分子聚类为同一复合类之间进行拮抗，分子聚 类为不同种类间进行拮抗，分子聚类亲缘关系比较远的种类间进行拮抗。结果是 各个种类间均存在拮抗和无拮抗现象，通过实验说明，分子标记和拮抗两种分类 方法既有联系又有区别，还可以自成体系。 新的菌株由于生理生态失控等因素，致使菌种退化或老化，直接影响品质， 造成栽培失败。因此常因菌种问题引起纠纷，甚至打官司。为了便于减少菌种退 化与老化，香菇菌种保藏实验研究显得格外重要。本论文设计了六个单因素进行 保藏实验，依次是：不同保藏方法、不同保藏介质、不同程序降温、不同菌龄、 不同解冻温度、不同防冻剂的研究。结果筛出最佳保藏方案为选取木屑培养基以 香菇幼龄保藏，防冻剂为10％甘油，使用程序降温仪降温(从4C至U-40℃降温速 度以1℃／min最好)保藏到液氮中，保藏后取出以25C-30C的水浴中解冻活化。 其中采用不同程序降温在香菇保藏中还是首例，通过试验对香菇菌种保藏起到了 一定的参考价值。 为验证不同方法保藏后测定的生长速度结果，对其进行了酶活力测定试验， 共测定了漆酶、CMC酶、木聚糖酶、淀粉酶4种酶活力曲线。从结果看出不同菌 种不同保藏方法这几种酶都有存在，而且测得的酶活力曲线和生长速度成正相 关，呈现了一定的规律性。这是在其它文献中没有提过的，从而也为香菇菌株的 保藏提供一定的生理生化依据。 关键词：香菇，SCAR，拮抗，保藏，酶活力 Abstract ofthecurrentmarketchaosmushroom behind Comparison species，strainlags more the chaos management，indiscriminateintroduction,namingcommon,resulting to inthesame or ismore notconducivemushroom homonymsynonymserious，is varietiesthe torevealthe ofmushroom objective geneticdiversity．Identification bacteriaisalsoof strainsofbacteriato resourcesand in degradation protect prevent this tothebasisofrelevantinformationbothat greatimportance．Inpaper,reference homeandabroad．combinedwimDNAmolecularmarkersandthe antago