盐角草磷酸乙醇n-甲基转移酶基因（peamt）及其启动子的克隆和表达分析.pdfVIP

人造理I：人学硕十’≯侮沦文 摘 要 盐角草(Salicornia 诈常生长，其体内主要的渗透调节物质是Na+和甘氨酸甜菜碱。在高等植物中，甜菜碱 是由胆碱经胆碱单加氧酶(choline aldehydedehydrogenase，BADH)催化生成的。 CMO和BADH已被转入到许多缺乏甜菜碱合成途径的植物中，但是转基因植物的 甜菜碱积累水平并不高，抗逆性提高程度也不显著，其原因主要是合成前体胆碱供应不 bp，5’非编码区301bp， 3’非编码区185 bp，含有一个可能的polyA信号，丌放读码框1，485bp，编码一个由494 个氨基酸构成的蛋白，与碱蓬、滨婪和菠菜PEAMT的氨基酸同源性分别为91％、85％ 和84％，在其N端和C端各有一个保守的腺苷甲硫氨酸结合区。 检测表明＆P剧M丁己在烟草基因组中整合并在转录水平表达，转基因烟草的胆碱含量 较对照提高了近lO倍，其耐盐性也有一定的提高。 启动子是基因表达调控的重要元件，目前PEAMT启动子仅从玉米中克隆获得，且 导表达。利用锚定PCR法获得了SePEAMT上游1，941 PLACE分析发现，该序列除了含有典型的启动子元件外，还有脱落酸诱导元件(ABRE)、 发现了花粉特异的活性元件。 将P删胛启动子序列与GUS报告基因融合构建表达载体并转化烟草，GUS组 织化学染色和荧光定量分析结果显示该启动子不仅在叶、茎和根中有表达，而且在花粉 中亦有很强的活力。非生物胁迫后的GUS荧光定量分析显示SePEAMT启动子的活性受 NaCI、低温、热激和ABA诱导，而PEG抑制其活性。 关键词：盐角草；磷酸乙醇胺N一甲基转移酶(PEAMT)；胆碱；启动子；诱导表达 盐角草磷酸乙醇胺N．甲基转移酶基冈及其启动f的兜隆羊¨表达分析 CharacterizationofaPEAMT and andits from Cloning promoter Salicornia halophyte europaea Abstract Salicornia iSadicot could in withsalinities europaea halophyte．whichgrowmarsh than3．5％andthe osmoticainits stemswasNa+and betaine greater major fleshy glycine (GlyBet)．In betaineis fromcholinecholine higherplants，glycin synthesis by betaine monooxygenase(CMO)andaldehyde dehydrogenase(BADH)． CMOandBADHhavebeen into thatlack the genes engineeredmanyplants GlyBet．but accumulationof are10Wandtheincrementsinstresstoleranceare GlyBet small．It hasbeenshownthatthelOWlevelsof inthe areduein