禾谷镰刀菌小ra通路相关基因的功能研究.pdfVIP

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2016-02-23 发布于贵州
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禾谷镰刀菌小ra通路相关基因的功能研究.pdf

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禾谷镰刀菌小ra通路相关基因的功能研究

禾谷镰刀菌小RNA通路相关基因的功能研究目录摘要……………………………………………………………………………………………………………………。i Abstract．………．…．．…．…．．…．…．…．．…………．…．………．．…．…．……．…………．．…．．…．……．．…．…………ii 缩略词表…………………………………………………………………………………iii 第一章文献综述…………………………………………………………………………1 1小麦赤霉病的研究进展………………………………………………………………1 1．1小麦赤霉病的分布和危害………………………………………………………1 1．2禾谷镰刀菌的生物学特征………………………………………………………2 1．3禾谷镰刀菌的研究进展…………………………………………………………3 2微小RNA的研究进展………………………………………………………………4 3小RNA通路相关基因的研究介绍…………………………………………………5 3．1Dicer蛋白的研究进展…………………………………………………………．．5 3．2 Argonaute蛋白的研究进展………………………………………………………7 4本实验的目的及意义………………………………………………………………．．9 1实验材料……………………………………………………………………………10 1．1菌株……………………………………………………………………………。10 1．2载体…………………………………………………………………………………………………10 1．3培养基…………………………………………………………………………．．11 1．4抗生素…………………………………………………………………………。12 1．5常用试剂及溶液………………………………………………………………一12 1．6设备仪器………………………………………………………………………．．13 2实验方法………………………………………………………………………………13 2．1基因序列分析…………………………………………………………………。13 2．2基因表达量分析………………………………………………………………。14 2．2．1基因组RNA提取………………………………………………………．．14 2．2．2eDNA的制备……………………………………………………………．14 2．2．3基因表达量检测…………………………………………………………15 2．3基因组DNA提取——CTAB法………………………………………………16 华中农业大学2013届研究生学位论文 2．4敲除载体的构建………………………………………………………………．．17 2．4．1 PCR方法构建基因敲除载体………………………………………．17 Split 2．4．2基因侧翼同源片段的获得………………………………………………．．17 2．4．3基因侧翼同源片段的纯化………………………………………………．．18 2．4．4侧翼片段与具有HPH抗性载体的连接…………………………………18 9 2．4．5重组质粒的热击转化……………………………………………………．．1 2．4．6重组质粒的筛选…………………………………………………………．．19 2．4．7重组质粒的鉴定…………………………………………………………．．20 2．4．8 PCR获得具有HPH的侧翼片段………………………………………．．20 2．5基因互补………………………………………………………………………．．21 2．5．1基因互补载体构建………………………………………………………．．21 2．5．2基因互补载体验证………………………………………………………．．21 2．6敲除转化子的鉴定……………………………………………………………．．22 2．6．1禾谷镰刀菌PH