转基因水稻中过表达维生素c代谢相关基因的研究.pdfVIP

2．2．2目的基因的表达分析…………………………………………………………………29 2．2．3 HPLC法测定叶片Vc含量…………………………………………………………。30 2．2．4水稻幼苗盐胁迫试验…………………………………………………………………31 2．3数据的整理和分析…………………………………………………………………………32 3．结果与分析……………………………………………………………………………………．33 3．1转基因水稻纯合系的筛选…………………………………………………………………33 3．1．1转基因水稻植株的潮霉素抗性……………………………………………………。33 3．1．2目的基因的PCR检测………………………………………………………………34 3．2杂交聚合不同转基因………………………………………………………………………36 3．3目的基因在转基因水稻中的表达分析……………………………………………………36 3．3．1目的基因在转基因水稻籽粒中的表达……………………………………………。36 3．3．2目的基因在转基因水稻叶片中的表达分析………………………………………．．37 3．4转基因水稻中维生素C含量的测定………………………………………………………40 3．4．1转单个基因水稻叶片中维生素C含量的变化……………………………………。41 3．4．2聚合转基因纯合系叶片中维生素C含量的变化…………………………………．．45 3．5转基因水稻幼苗的盐胁迫表现……………………………………………………………45 4．讨论……………………………………………………………………………………………………………………………49 4．1导入合成途径中关键酶基因对转基因植株Vc含量的影响……………………………49 4．2导入循环再生途径中关键酶基因对转基因植株Vc含量的影响………………………50 4．3基因聚合提高植株Vc含量的效果………………………………………………………50 1 4．4有关Vc抗逆性的研究……………………………………………………………………5 4．5 1 Vc在籽粒中的合成途径…………………………………………………………………．．5 4．6展望………………………………………………………………………………………………………………………52 参考文献…………………………………………………………………………………………．53 附表………………………………………………………………………………………………．61 致 谢…………………………………………………………………………………………．63 攻读硕士学位期间文章发表情况………………………………………………………………．64 扬州大学学位论文原创性声明和版权使用授权书……………………………………………．65 转基因水稻中过量表达维生素C代谢相关基因的研究 研究生：刘如如 指导老师：刘巧泉教授 (扬州大学，江苏扬州，225009) 摘要 维生素C(VitaminC，Vc)是植物自身合成的抗氧化剂，对植物的生长发育具有重要的 生理功能。维生素C的缺乏也会严重影响人类的身体健康，但是人类和一些灵长类动物由 于体内缺乏合成维生素C的最后一个酶，所以必须从膳食中获取。因此提高食物中的Vc 含量和利用Vc增强作物抗逆能力的研究显得尤为重要。水稻是禾本科作物的重要模式植 物，也是世界重要粮食作物之一：通过转基因的途径提高植物体内Ve含量，进而改善植物 营养品质和提高抗逆能力，是一个重要的研究方向。 本研究围绕提高水稻Ve含量这一目标，在本实验室前期已培育含维生素C代谢相关 基因转基因水稻的基础上，主要开展以下四方面的研究：(1)通过叶片潮霉素抗性检测和 目的基因PCR分析筛选转基因纯合系和聚合两个转基因的纯合系