一粒系小麦高分量谷蛋白亚基1ay的分布及其编码基因的结构特点.pdfVIP

四川农业大学硕士论文 一粒系小麦高分子量谷蛋白亚基1Ay的 分布及其编码基因的结构特点 研究生：胡喜贵 指导教师：伍碧华研究员 摘 要 (Triticum urartu)、野生一粒小麦(zboeoticum)和栽培一粒小麦(zmonoeoccum)。 作为多倍体小麦A染色体组的供体物种，一粒系小麦一直被认为是改良小麦的重要 基因资源。已有研究表明，一粒系小麦存在普通小麦中根本不表达的1Ay亚基。本研 究通过对44份一粒系小麦lAy的分布及其编码基因进行克隆、测序、结构分析、原 核表达，以及序列比对，获得主要结果如下： 1． 一粒系小麦的高分子量谷蛋白lay亚基多样性 遍存在lAy亚基的表达。供试的乌拉尔图小麦、野生一粒小麦和栽培一粒小麦的分 显的多态性。3种供试物种中分离出齐平于和快于1Dyl2，齐平、快于和慢于1Bx7， 基附近，而野生一粒小麦和栽培一粒则以集中在1Bx7附近为主。尽管一粒系小麦lay 的表达与地理来源有关，但也存在变异，体现在来源地不同的同一物种的lay表达 频率相异，又体现在来自同一地区材料的lay迁移率存在明显的多态性。 2． 乌拉尔图小麦lAy的一级结构 利用一对扩增高分子量谷蛋白亚基引物，对1份乌拉尔图小麦材料(P1428281) 的基因组DNA进行PCR扩增得到一条长度大约1．8kb的片段。扩增产物克隆到 PMDl8一T载体中，经梯度亚克隆测序拼接。序列分析表明，该片段为lay亚基编码 四川农业大学硕士论文 基因。GenBank登录号为：FJ404595。 TGATAG结束，编码608个氨基酸残基。推导的氨基酸序列具有典型y．型高分子量 谷蛋白亚基的结构特征，由21个氨基酸残基的信号肽，104个氨基酸残基的N．端保 个Cys)四部分组成。其重复区多肽类型较为丰富，高达65个，包括十二肽、十一 肽、九肽、六肽、三肽，以及少见的五肽类型。其中，六肽高达69．23％。 进一步分析发现，lay的编码序列含有很多稀有密码子，均为单个稀有密码。其 Pro密码子最少，仅8．00％(2／25)。所有稀有密码子彼此间隔地单个存在于整个编 码序列中。 3．1ay基因推导氨基酸序列预测的二级结构 通过PSIPRED对克隆的-砂基因推导的氨基酸序列进行二级结构预测，结果显 示，·在信号肽、N-末端和C．末端都有0【一螺旋结构，p一折叠结构仅出现在信号肽和N- 末端，重复区全为无规则卷曲结构。 4．1ay基因的体外表达 设计一对不含信号肽编码区的表达引物，从整合有上述lay的质粒PMDl8-T中 外表达的蛋白与种子中的HMW-GS迁移率基本一致。 5．乌拉尔图小麦lAy亚基与其它HMW-GS的关系 5．1成熟蛋白氨基酸组成 通过对乌拉尔图小麦的]Ay与来自不同物种的9个y．型HMW-GS的成熟蛋白氨 基酸组成比较显示，lay具有v．型亚基氨基酸组成的共同特性，比如，其含量最高的 率的六肽PGQGQQ中，是氨基酸序列的主要成分。该三种氨基酸的总含量与其它Y一 四川农业大学硕士论文 型亚基相近(60．00 m01％)。 5．2聚类分析 以大麦D．hordein作为外类群，对本研究所克隆的1Ay亚基与来自小麦属四倍体、 六倍体和山羊草属以及黑麦属的7个X．和9个y-型亚基的N端+C端氨基酸序列及 全氨基酸序列进行序列比对，两种分析呈现出一致的聚类结果，均首先分为x．型和 y．型两个大类。lay亚基以80％以上的可靠度与Ny亚基聚在一起，说明来自一粒系 小麦的lAy与来自单芒山羊草(Aegilops 相似性。 关键词：一粒系小麦；高分子量谷蛋白亚基；lAy；迁移率；分布；分子克隆；序列 分析；原核表达 四川农业大学硕士论文 ofHMW—-GSandtheStructure Distribution lAy ofthe GeneinEinkornWheat Character