小麦cdpk基分子特征、表达和tacdpk1遗传转化.pdfVIP

摘 要 钙依赖蛋白激酶（Calcium-Dependent Protein Kinase, CDPK ）以多基因家族的形 式存在，是介导非生物逆境信号转导的重要保守信号传递体。迄今，尽管在拟南芥和 水稻中有关CDPK成员的鉴定、分析具有较多报道，但在小麦中有关CDPK基因的克 隆和功能的研究还报道较少。本项研究利用生物信息学技术和基因遗传转化技术，对 5个小麦CDPK基因（TaCDPK1~TaCDPK5）的分子特征、在不同供磷水平下的表达特 性和异源表达TaCDPK1的烟草耐低磷能力进行了研究。主要研究结果如下： 1. 在国际生物信息学网站NCBI ，直接查找已递交至GenBanK 的小麦CDPK序列。 查找后得到5个已知cDNA序列但少见分子特征和功能研究的小麦CDPK基因。本研究 中，作者将该5个基因分别命名为TaCDPK1~TaCDPK5。TaCDPK1~TaCDPK5的cDNA 的序列变化在1654 bp （TaCDPK1）至1960 bp （TaCDPK4）之间，ORF变化在1542 bp （TaCDPK5）至1677 bp （TaCDPK3）之间，翻译的氨基酸数量变化在513 （TaCDPK5） 至558-aa （TaCDPK3 ）之间。TaCDPK1~TaCDPK5含有植物种属CDPK特有的保守区 域，包括均含有1个蛋白激酶结合区和4个EF手型结构钙结合区。系统进化分析表明， 供试5个小麦CDPK基因可能具有不同的祖先。 2. 以磷高效小麦品种石新 828 为材料，对 5 个供试小麦 CDPK 基因 TaCDPK1~TaCDPK5 的表达特性进行了研究。结果表明，TaCDPK1 和TaCDPK5 的表 达受到低磷胁迫的诱导。TaCDPK2 和TaCDPK4 在根系和叶片中的表达水平一致，且 在正常供磷水平下（CK ）与不同低磷处理时间下，转录本的数量没有变化，表明上 述2 个基因的表达对外界磷浓度的变化不产生应答。在正常生长和低磷胁迫条件下， 小麦植株根系和叶片中均未检测到 TaCDPK3 的转录本。上述结果表明， TaCDPK1 和TaCDPK5 对低磷逆境产生了应答，通过上调表达，可能参与了小麦植株对低磷逆 境信号的转导、响应或抵御过程。 3. 利用DNA 重组技术，构建了融合TaCDPK1 编码阅读框（ORF ）的双元表达 载体。并通过农杆菌介导的遗传转化，建立了异源表达TaCDPK1 的烟草转基因系。 结果表明，异源表达TaCDPK1 的烟草植株，在低磷胁迫条件下的植株吸收磷素的能 力增强，表现为低磷胁迫后的植株磷素累积量、单株鲜重和单株干重较对照植株明显 增加。此外，在低磷胁迫条件下，异源表达TaCDPK1 的烟草植株，较对照植株具有 较高的光合色素含量、可溶性蛋白含量和可溶性糖含量。研究表明，异源表达 TaCDPK1 的烟草植株，低磷处理后植株体内磷素吸收数量的增多，使植株体内磷胁 迫逆境得到相对缓解，对于改善植株的生理功能，进而改善植株的生长发育状况具有 重要作用。 关键词：小麦（Triticum aestivum L. ）；钙依赖蛋白激酶（CDPK ）；分子特征；表 达特性；基因遗传转化；功能鉴定 The Molecular Characterization, Expression Patterns of Wheat CDPKs and Genetic Transformation of TaCPK1 Master candidate: Long su-xia Major: Crop Molecular Biology for High Yield and Elite Quality Supervisor: Xiao kai Abstract Acting as the important conserved signal transduction components of abiotic stress cue