小麦lmw-g基因克隆、类群划分及其特异分子标记开发研究.pdfVIP

小麦LMW．GS基因克隆、类群划分及其 特异分子标记开发研究 博士生：龙海 指导教师：郑有良教授 摘 要 小麦LMW—GS是重要的种子贮藏蛋白，与品质关系密切。本文在对 行了分类与染色体定位，并针对各类基因丌发染色体组特异性分子杯记。 主要研究结果如下： 1．小麦LMW．GS基因的分子克隆 根掘己知LMW—GS基因保守序列设计引物，采用PCR法从小麦品种 5644、 f存在提自u终止害码子，推测为假基因。LMwCNl 和￡肘矿9D8—2则与己报道的LMW—GS基因及预测蛋白的一级结构存在较 大差异，可能对谷蛋白多聚体形成有一定影响。 2．1．Mw—GS基因的类群划分L了染色体定位 通过对从数掘库下载的69个LMW—GS基因进行推导氨基酸序列比 对及聚类分析发现，根据其高度保守的N未端推导氨基酸序列，可将这 69个基因划分成9种类群。根掘DNA序列比对结果，针对各类基因共设 l _●， 计了11对引物，利用中国春第l同源群双端体系的总DNA进行PCR扩 窜 增束对各类基因进行染色体定位分析。结果发现，9对引物为LMW．Gs 基因类群特异性引物。9类基因都具有唯一的染色体位霄，其中3类基因 基因。这不仅使我们对LMW．GS基因这个多基因家族的组成及组织结构 有了深入的认识，同时也为根据基因序列来推删其所在染色体定位提供 了理论依掘。利用9对特异引物对27份二倍体小麦及山羊草属物种的扩 。 ： 增结果进一步验证了分类及染色体分析的可靠性。此外，LMW—GS基因 一 ‘ 类群l、2，以及3、4．1特异的引物分别在A基因组和s基因组的材料中 检测到DNA片段的长度多念性，表明这些物种中具有新的LMW．GS基 因等位变异，可作为重要的遗传资源，对小麦的品质改良及拓宽小麦的 加工特性有潜在应用价值。同时本实验丌发的9对特异引物可方便、陕 速地检测LMW—GS基因的长度变异，对分子标记辅助育种具有重要的应 用价值。 3．LMW．GS基因57侧翼保守序列染色体组特异性DNA变异分析与验证 根据33个LMW—GS基因5’侧翼序列的相似性进行聚类分析，可将 其划分成8个类群，这与基于N未端推导氨基酸序列进行的类群划分结 果完全一致。序列比对发现，各类群基因5’侧翼保守序列『司存在DNA多 态性，共发现34个多念性位点，其中l8个为潜在单核苷酸多念性位点 ． nucleotide (SNPs，single ’ 余7个类群的5’侧翼序列均具有类群特异性DNA变异位点。根据类群问 的DNA多态性对这7个类群设计了特异引物，利用普通小麦品种中国春 及其第l同源群双端体系对其进行染色体定位分析，揭示了1AS、lBS 了不同染色体组上的LMW，GS基因类群间5’侧翼序列具有特异性。这些 结果表明，LMW—GS基因的编码区及其5’侧翼保守序列可能是协调进化 的。本文报道的7对引物可对7类LMW—GS基因的完整编码区进行特异 扩增，因而能在小麦复杂的遗传背景下有目的地对某一类LMW—GS基因 进行分离克隆，这有助于弄