微生物多酚氧化酶源筛选及其在茶黄素合成中的应用.pdfVIP

摘 要 药理和保健功能，在天然药物、功能食品、日用化工、功能饮料开发领域有着广 泛的应用前景。但是红茶中茶黄素的含量低(约为O．2也％)，从红茶中提取制备 茶黄素分离纯化难度大，且得率低，这严重影响了茶黄素产业化开发的进程。而 茶黄素的体外生物合成是解决这一问题的最有效途径。为解决茶黄素体外生物合 成中的技术瓶颈，本文从茶黄素合成所需多酚氧化酶的酶源入手，利用微生物繁 殖快、易培养、酶产量高的特点，通过筛选多酚氧化酶的产酶菌种，旨在获得能 用于发酵生产茶黄素的高活性多酚氧化酶。 (1)本研究从耐酚能力、儿茶素鉴别培养基的菌落形态观察、液体摇瓶发 酵几个方面对冠突散囊菌、黑曲霉、毛栓菌3个菌种进行考察，发现冠突散囊菌 有一定的耐酚能力，在O．2％儿茶素浓度培养平皿上生长良好，不产生变色圈， 液体深层培养产酶能力弱；黑曲霉耐酚能力较强，在O．1~o．舷的儿茶素培养基 上生长较好，且能产生透明水解圈，液体深层发酵黑曲霉不产生多酚氧化酶；毛 栓菌在O．1～0．2％的儿茶素培养皿上生长好，能产生黄红色的氧化圈，液体深层 发酵能产生多酚氧化酶，酶活力为328u／mL，所以选择毛栓菌为产酶菌种，并 做进一步的产酶培养基及产酶培养条件的筛选。 (2)筛选得到毛栓菌在液体深层发酵过程中培养的较适培养基组成为：马 铃薯2％，KH2P04 0．3％，VB0．00l％，caCl20．005％，麸皮l％， 0．3％，MgS04 酵母膏O．6％，酪氨酸0．001m01尼。培养条件以32℃，110 r／min为佳，接种量 宜控制在4-215×105个／ml为宜，在此条件下酶的活力较高，培养条件改良后， 酶活力可达711 U／mL，较培养条件改良前的(328U抽L)提高了116．8％。 (3)毛栓菌所产生的胞外多酚氧化酶较适的反应温度范围在28～36℃之 间，作用的最适pH值为5．2。恒温反应30min内均表现出较高的活性，而在反 应的前6min内其活性与反应时间存在较好的线性关系。以浓度为50％的硫酸铵 可以沉淀粗酶液中96．O％的多酚氧化酶。 (4)将毛栓菌多酚氧化酶加入到儿茶素反应液中进行双液相反应，可得到 10．19％的茶黄素，与对照(茶鲜叶来源的多酚氧化酶)相比，总含量较低(对照 为20．0l％)，但从茶黄素组成来看，毛栓菌来源的酶其酶促合成的茶黄素中酯型 茶黄素的比例较高，达到98．03％，为对照(53．75％)的1．82倍。 关键词： 茶黄素 多酚氧化酶菌种筛选毛栓菌酶促合成 Abstract on tea．Itllassome t11e influence缸tor TheanaviⅡs(TFs)iskey qual蚵ofblack are intlle efrccts．There power血l extellsive印plicationprospects phaHnac0109ical chemical 丘ddsofnatunIrr埠dicine，矗mction8lfoods，“Iy bdustry，fU眦donal bl∞k contentsoft11eanavinsin tea beverage，etcHowever，the is】ower(0．2～2，O％)． t11e nis t