甜菜离体培养直器官发生及遗传转化的研究.pdfVIP

摘要 甜菜是重要的糖用和饲料作物，糖用甜菜提供了全球约30％的食糖：饲料甜菜是家畜最佳的多 汁饲料，块根肥大，营养丰富。由于栽培驯化时间较短，加上它又是一种2年生的异交作物，遗传 背景狭窄，资源贫乏。特别是自交高度不亲和性，往往使得优良单株基因型很容易丢失，给优良品 种选育材料的繁殖和保存带来了极大困难。现代生物技术的发展给甜菜育种方法开辟了一条新途径。 然而，由于甜菜组织培养重复性差，愈伤组织难以诱导，植株再生受基因型限制，这些问题严重影 响到植物基因工程技术在甜菜育种上的实际应用，加剧了传统育种方法的局限性，导致我国糖甜菜 与甘蔗糖竞争中处于极大劣势；同时伴随着多种病害的影响，导致种植面积大幅度减少，产业的发 展面I临严峻考验。 针对上述存在的诸多问题，本研究以甜菜六个不同品种为材料，在高频率诱导多芽的基础上， 进行抗病基因的转化及检测，并分析材料在不同阶段的同工酶变化，为培育新种质奠定基础。 1用供试的六个材料，切取子叶节，接入诱导多芽培养基上进行培养；不同品种间的多芽诱导 率差异不大，在以子叶节为外植体，对芽进行诱导时，不受基因型限制。 2所用卡那霉素的浓度为150m玑，抗性不定芽分化率较高。羧苄青霉素的浓度为800m叽时， 才能有效抑制感染外植体的农杆菌。如有返菌现象，可用含800mg／L羧苄青霉素的无菌水冲洗，即可 抑菌，且对材料无伤窖。乙酰丁香酮(As)可诱导基因的活化，可提高转化率，本试验加入量为 100mg，L· 3采用BA和NAA的激素组合，进行茎节外植体芽的诱导，随着BA浓度的提高，芽诱导率也提 高，但有部分玻璃化苗的出现，切去叶片，留茎节，可长出正常芽。在供试品种中，51130，51132 较其它品种玻璃化程度高。 4用小芽进行扩繁时，材料不受基因型限制；在用叶片和叶柄进行多芽诱导时，受材料基因型 的限制，不同品种诱导率有差异。 尖冒出，20天后根系发达。 6在对转RF和PBVP6基因的植株进行PcR检测时，可以清楚地看到在相应于阳性对照位置上 有些转化的甜菜植株显示了条带，即含有BNr、，VcP和BBsV基因的PcR扩增片断，可初步表明 所转基因存在于有阳性条带的转化甜菜中。 蛋白出现了酶带条数和颜色深浅的变化，推知其变化可能与控制多芽发生的代谢活动有关：遗传转 化后出现了明显的酶带颜色加深和新酶带的增加，这是否由于外源基因的导入甜菜而具有抗逆性的 标志，还是转基因的直接作用效果还有待于做进一步的研究。 遗传转化 酯酶 关键词 甜菜(细Ⅷ培n廊L) 过氧化物酶 可溶性蛋白 of onInductiOn ShootsandGenetic study MultipIe 7I’ransfbrmationof Sugarbeet觑，豇阳 ABSTRACT isan aboIIt crop，aⅡOver proVides SugarbeetiIIlpor啪tsugar锄dfomge tIle、vorId，sugarb∞t鹪sugar 30 isbest鲫cculentfbed is percentsug缸forpeople．Sugarbeet嚣向嘲gc ns isabund觚t．Becdu辩ofcultivated锄ddomesticatiVe石mefor isshon nu埘tion weigIl咄锄d sugarbeet is 卸ditjs andxenial