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蛋白质变性例子: 链霉素生产中，采用调pH至酸性（pH3.0），加热至70℃，维持半个小时的方法来使蛋白变性，能使过滤速度增大10-100倍，滤液粘度可降低1/6。 柠檬酸发酵液，采用加热至80℃以上，使蛋白质变性凝固和降低发酵液粘度，从而大大提高了过滤速度。 3) 吸附法 adsorption 加入某些吸附剂或沉淀剂吸附杂蛋白质而除去。 四环类抗生素生产中，采用黄血盐和硫酸锌的协同作用生成胶状沉淀来吸附蛋白质，利用此法除蛋白质已取得很好的效。 在枯草杆菌发酵液中，常加入氯化钙和磷酸氢二钠，这两者本身生成庞大的凝胶，把蛋白质、菌体及其它不溶性粒子吸附并包裹在其中而除去，从而加快了过滤速度。 思考题： 1.为什么要进行发酵液预处理？ 2.絮凝和凝聚的定义和区别。常用的絮凝剂和絮凝剂有那些。 3.发酵液分离的主要方法。 * 2.发酵液的预处理 * 生物分离过程的一般流程 * 固液分离 发酵液 胞外 上清液/滤液 预处理 生化分离的第一步，提取生化物质的第一步，分两部分： 胞内 富集细胞 影响发酵液后处理的主要因素 粘度,杂蛋白 影响树脂对产物的吸附能力； 在萃取操作中，易产生乳化，不利 于两相的分离； 污染滤膜，降低滤速 高价无机离子 当采用离子交换法提取产物时，影响树脂对生化物质的交换容量 预处理的目的：降低发酵液粘度 去除杂蛋白和高价无机离子 发酵液预处理的方法 1.加热法 Heating 2.调节悬浮液的PH值 Regulation of PH 3.助滤剂Filter aids和反应剂 Reactant 4.凝聚和絮凝 Coagulation and flocculation 5.杂蛋白的去除 Removal of useless protein 1.加热 1）加热降低液体粘度 液体黏度是温度的指数函数，升温是降低黏度的有效措施。可有效提高过滤速率。 加热是发酵液预处理最简单最常用的方法。加热能改善发酵液的操作特性。 麦芽汁的黏度-温度曲线。 2）加热使蛋白质变性凝固 变性蛋白质的溶解度小。如柠檬酸发酵液加热至80℃以上，可使蛋白质变性凝固，过滤速度加快。 2.调整pH 1)pH值直接影响发酵液中某些物质的电离度和电荷性质，适当调节pH值可改善其过滤特性. 2)调节发酵液的pH到蛋白质的等电点是除去蛋白质的有效方法。大幅度改变pH还能使蛋白质变性凝固。 3)细胞、细胞碎片及某些胶体物质等在某个pH值下也可能趋于絮凝而成为较大颗粒，有利于过滤的进行。 ? 0 0 200 400 600 6 12 18 pH 4.6 pH 4.2 pH 3.8 pH 2.8 Filtrate Volume, cm 3 Time,minutes Fig The effect on filtrate volume of pH 3.凝聚与絮凝 凝聚与絮凝处理就是将某些化学药剂预先投加到悬浮液中，改变细胞、菌体和蛋白质等胶体粒子的分散状态，破坏其稳定性，使其聚集起来,增大体积以便固液分离。 凝聚和絮凝技术常用于菌体细小而且黏度大的发酵液的预处理中。 机理：1）中和粒子表面电荷,消除双电层结构 2）破坏水化膜 （1）凝聚 指在投加的化学物质（铝、铁的化合物）作用下，使粒子相互聚集成１ mm 大小块状凝聚体的过程。 胶体双电层结构 发酵液中菌体表面带有负电荷，由于静电引力使溶液中反离子被吸附在其周围，在界面上形成了双电层。 蛋白质分子表面的疏水区域和荷电区域 阳离子对带负电荷的胶粒凝聚能力的次序为： Al3+ Fe3+ H+ Ca2+ Mg2+ K+ Na+ Li+ 常用的凝聚剂电解质有： 硫酸铝 Al2(SO4)3?18H2O（明矾）； 氯化铝 AlCl3?6H2O; 三氯化铁 FeCl3; 硫酸亚铁 FeSO4·7H2O ； 石灰；ZnSO4；MgCO3 （2）絮凝 指使用絮凝剂（天然的和合成的大分子量聚电解质）将胶体粒子相互连接，形成10mm大小絮凝团的过程。 絮凝剂是一种能溶于水的高分子聚合物，长链状结构，其链节上含有许多活性官能团，包括带电荷的阴离子（如---COOH）或阳离子（如---NH2）基团以及不带电荷的非离子型基团。 絮凝剂通过静电引力、范德华引力或氢键的作用，强烈地吸附在胶粒的表面。 高分子絮凝剂的吸附架桥作用 * 絮凝剂的类型： 工业上使用的絮凝剂可分为四类： 人工合成有机高分子聚合物 天然有机高分子聚合物 无机高分子聚合物 微生物絮凝剂 1）人工合成有机高分子聚合物： 目前常用的是人工合成有机高分子聚合物，如聚丙烯酰胺类衍生物、聚乙烯亚胺衍生物；聚丙烯酸类和聚苯乙烯类衍生物。 高分子聚合物絮凝剂根据活性基团在水中解离情况不同，可分为三