基因载体的选择与构建创新.pptVIP

1) 用限制性内切酶消化 DNA 样品 2)用限制性内切酶消化 质粒DNA 3) 连接样品DNA和质粒DNA的消化产物 4) 用连接产物转化大肠杆菌感受态细胞 5) 涂布在琼脂平板上进行耐抗菌素筛选 1）用限制性酶消化 DNA 样品 粘性末端 3）连接样品DNA和质粒DNA的消化产物 冷循环器 4）用连接产物转化大肠杆菌感受态细胞 转化细菌有两个基本方法。 一是 化学法，即用CaCl2 处理并加热激以促进DNA进入菌体； 二是电激法，即 施加短脉冲的电荷以促进DNA 吸收。 5）细菌在加有Amp+X-Gal的培养基上生长以进行筛选 筛选会有三种结果： 一是要插入的序列自连，结果没有菌落形成； 二是切开的质粒重连，结果表现为蓝色菌落； 三是要插入的序列与质粒相连，产生白色的抗氨苄青霉素菌落。 倒平板 加IPTG和X-GAL 乳糖和诱导物IPTG的化学结构 X-gal X-gal水解 筛选结果 蓝菌落代表含有质粒的耐药菌，表达出由完好的α LacZ序列编码的功能性的 α 片段 白菌落代表含有质粒的耐氨苄青霉素菌，质粒上α LacZ序列上有插入片段 筛选结果模式图 蓝菌落 蓝白菌落 Thank You! isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside