高效联合固氮菌筛选、鉴定及其生理生化特征和接种效应研究.pdfVIP

致谢 本论文是在方萍教授和石伟勇教授两位老师的悉心指导下完成的．方老师渊博的知 识、开阔的思路、严谨的治学作风、豁达平易的待人风格给了我很多启迪，将是我终生 学习的楷模，在学习和生活上对我无微不至的关心，更令我无法忘怀。石老师扎实的专 业知识和实践技能、刻苦勤奋的工作作风使我永记脑海，对我以后的工作学习必将产生 久远的影响．没有两位导师在各个方面耐心的谆谆教诲和批评指正，要完成此论文是不 可想象的，在此谨向两位导师表示我最诚挚的感谢和敬重之情． 本论文得到了生命科学学院贾小明副教授的精心指导和大力帮助。余慎博士在菌种 鉴定实验中提供了热情的帮助，并为论文提出了宝贵的建议．在论文研究开展过程中还 得到了本系的陶勤南教授、倪吾钟副研究员、马国瑞教授、励仁安教授、叶正钱副教授、 周钗美老师、何积秀老师和生物系的林小青老师等的热心指导和帮助．在此向他们致以 深深的谢意． 非常感谢季天委硕士和李廷轩博士的全力支持，对我的工作他们总是有求必应，慷 慨相帮，每每让我感动不已．实验的进行过程中，朱维琴博士、夏会龙博士、余观梅硕 士、张红辉硕士、方素萍硕士、郁晓敏硕士、王强硕士、余剑东硕士、孙晓华硕士及在 本实验室实习的陈永根、朱日清、方波、周学来、胡彬华等同学都给予了热情帮助，李 志刚博士为实验提供了水稻种子，杨行妃女士在试验实施中付出了辛勤的劳动。在此一 并向他们表示衷心的感谢和良好的祝愿。 感谢三年来学校、学院各级领导和研究生科各位老师的关怀与支持。 最后，向一直以来给我无限关爱、理解和支持的家人及朋友表示我深深地感激和谢 意。 张丽梅 2002年5月于华家池 摘要 农田生态系统中长期单一、过量偏施化学肥料特别是化学氮肥，造成农产品品质下 降，肥料利用率低，不仅增加了农业生产成本，还严重污染环境，已成为农业可持续发 并证实了禾本科植物同样具有生物固氮的潜能。因此，充分发掘和利用禾本科植物的生 物固氮潜能，将是确保农业可持续发展的重要途径。 本研究分离、筛选得到一株固氮酶活性高且稳定，生长势强的联合固氮菌株，并对 其分类地位、形态及生理特征、对环境的适应性及其对植物的促生效果和作用机理作了 系统研究Z、姆结果如下。 固氮菌株的筛选与鉴定：测定从不同来源分离、收集和保藏的12个固氮菌株或分 离物在不同保存时期的固氮酶活性和生长能力，发现多数菌株在初分离得到时固氮酶活 性较高，但随着转接次数的增多却逐渐丧失固氮酶活性，生长也随之减弱，只有W12 在五年前从埃及分离得到至今一直保持旺盛生长势和较高的固氮酶活性，48h内乙烯生 成量可达1800 高于其它菌株。通过比较多个菌株与同一水稻基因型的联合固氮效率及W12与不同基 因型的水稻的联合同氮效率，发现供试菌株中W12与水稻的联合固氮效率最高，且远 远高于其它菌株；同时这种高的固氮效率在不同的水稻基因型之间没有表现出显著差 异。在无氮培养基上该菌在13 h后进入对数生长期，并持续至48～52h，这期间其生长 为革兰氏阴性菌，短杆状，对数生长期细胞大小为：2．0x1．6“m，单个排列；兼性厌氧， 氧化酶阴性，发酵葡萄糖产酸产气，不运动。结合Biolog系统对其进行鉴定，结果确 定该菌为肺炎克雷伯氏菌肺炎亚种(Klebsiellapneumoniae 病菌。 W12菌株对环境因子的适应性研究：无氮培养条件下，测定温度、碳源、酸碱度、 活性，其最适生长及固氮的温度为25．35C；能利用葡萄糖、蔗糖、苹果酸、甘露醇等 多种碳源生长并固氮，当培养基中同时存在蔗糖和苹果酸时，细菌生长和固氮活性最强； 在偏酸和偏碱的条件下QH4．5-8．5)均能保持较强的生长势和较高的固氮酶活性，并能通 过调节自身代谢平衡并适应环境的酸、碱性变化，使培养液趋于中性：能耐受较高的渗 2％时，菌株的生长势及固氮酶活性才有所下降；低浓度的铵对其固氮酶活性影响不大， 在0．5．1mmol／1．,的铵浓度下，分别保持6l％和44％的固氮活力。 从我们的实验结果还可得出，在无氮培养条件下，菌株的生长量同其固氮酶活性成 正相关，固氮酶活性越高。W12生长越旺盛。由此可看