最新第二章蛋白质(上).ppt

(一)氨基酸的一般物理性质 α-氨基酸为无色晶体，不同氨基酸晶体形状不同。 熔点:氨基酸熔点较高，一般在200～300°C。 溶解度:氨基酸的溶解度差别很大，溶于稀酸稀碱，但不能 溶解于有机溶剂。酒精能把氨基酸从其溶液中沉淀析出。 味感:各种氨基酸有不同的味感:甜、鲜、苦、无味。谷氨 酸的单钠盐有鲜味，是味精的主要成分。 旋光性：除甘氨酸外，氨基酸都具有旋光性，能使偏振光 平面向左或向右旋转，左旋者通常用（-）表示，右旋者用 （+)表示。 内容三 氨基酸的理化性质 芳香族氨基酸在pH8时紫外吸收光谱（280nm） 光吸收：20种基本氨基酸在可见光区没有光吸收，但 在远紫外区(220nm)均有光吸收。在近紫外区(220- 300nm)只有酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸有吸光能力。 在280nm处，Trp吸收最强，Tyr次之，Phe最弱。280nm处光吸收的测定，是定量蛋白质浓度最常用的方法。 紫外吸收性受溶液pH的影响 （二）氨基酸的两性解离和等电点 同一分子上带有数量相等的正负两种电荷的离子称为两性离子或兼性离子。 氨基酸在水中的两性离子既能像酸一样放出质子，也能像碱一样接受质子，具有酸碱性质，是一类两性电解质。 pH1 pH11 pH6 对某种氨基酸来讲，当溶液在某一特定的pH时，氨基酸以两性离子形式存在，正电荷与负电荷数相等，净电荷为零，在直流电场中，既不向正极移动，也不向负极移动，这时溶液的pH值称为氨基酸的等电点（isoelectric point，pI).）。 在pI时，氨基酸的导电率最低，溶解度最小，容易发生沉淀。 pH pI，氨基酸带负电荷，-COOH解离成-COO-,向正极移动。 pH = pI，氨基酸净电荷为零 pH pI，氨基酸带正电荷，-NH2解离成-NH3+，向负极移动。 自测 丙氨酸Ala的 pI＝6.02，在pH＝7时，在电场中向（ ）极移动。 答案：正 氨基酸的每一功能基团都能被酸碱所滴定，可根据氨基酸的 滴定曲线来推算pK值：滴定中点时的pH。 pK值为某个可解离基团、侧链基团的解离常数的负对数。 pI(等电点)：是pK1和pK2的算术平均数，即两性离子两侧的 基团的pK值之和的一半。 k1 k2 Ala+ Ala+/ Ala± Ala± Ala- Ala±/Ala- 2 中性氨基酸：以Gly为例 [H+]2=K1K2 pH=（pK1+pK2）/2 pI=（pK1+pK2）/2 pI =（2.34+9.60）/2=5.97 Gly K1= [Gly±] [H+] [Gly+] K2= [Gly- ] [H+] [Gly±] pI时， [Gly+ ] = [Gly- ] [Gly±] [H+] K1 = [Gly±] K2 [H+] 酸性氨基酸，以Asp为例： Asp+ Asp- Asp= Asp+ 碱性氨基酸，以Lys为例： Lys++ 1、与茚三酮反应 α-氨基酸与茚三酮试剂共热，可发生反应生成蓝紫色化合物， 脯氨酸和羟脯氨酸得到的是黄色物质，A570反应AA的含量。 该方法可以定性、定量测定氨基酸的含量。 （三）氨基酸的化学性质 2. 与甲醛反应 甲醛滴定法：氨基酸氨基pKa值较小，而羧基的pKa值较大，完全电离的pH约在12～13，用一般的指示剂很难准确判断其滴定的终点。在中性pH和常温下甲醛能很快与氨基酸的a-氨基结合，产生羟化物。使得pH下降2-3个单位，这时可用酚酞作指示剂。 甲醛滴定法不仅用于测定氨基酸含量，也常用来测定蛋白质水解程度。 3、Sanger反应（酰基化） 英国的Sanger用该反应鉴定多肽N-未端的氨基酸，从而测定多肽或蛋白质的AA排序。近年来多采用5-二甲氨基萘磺酰氯（DNS-Cl）,又叫丹磺酰氯代替DNFP测定蛋白质的N-端，产生的DNS-氨基酸有荧光可方便检测。 异硫氰酸苯酯 苯异硫氰氨基酸 苯氨基硫甲酰(PTC)衍生物 苯硫乙内酰脲 4. 与异硫氰酸苯酯（PITC）反应 PITC也能与多肽链N端 氨基酸反应用于测序。 含游离α-氨基的氨基酸（不含脯氨酸）能与亚硝酸起反应，定量地放出氮气，氨基酸被氧化成羟酸。在标准条件下测定生成的N2↑的体积，即可计算氨基酸的量，称为范斯莱克(van Slyke)法，此方法常温下三四分钟即可完成。 5. 与亚硝酸反应 6、与荧光胺反应 氨基酸可与荧光胺反应，产生荧光产物，可用荧光分光光度计测定氨基酸含量。用激发波长390nm，发射波长475nm测定产物的荧光强度，可以测定氨基酸的含量。 作业： 1.复习氨基酸的分类和