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扁蓿豆aflp系的建立及在其遗传完整性检测中的应用
摘 要
AFLP(Amplified fragment length polymorphism)是一种新型的分子标记技术,目
前已广泛应用于生物遗传多样性研究、种质资源鉴定及动植物育种等领域的研究。
本试验建立了适合扁蓿豆的AFLP 分析体系,并首次使用AFLP 分子标记对扁蓿豆
(Medicago ruthenica L. )种质的遗传完整性进行检测。以期为扁蓿豆种质资源保
存、扁蓿豆分子遗传图谱的构建提供理论依据。主要研究结果如下:
1. 建立了适合扁蓿豆的AFLP 分析体系。具体内容为:模板DNA 的用量范围
为100ng-600ng ;酶切体系中,EcoR Ⅰ和Mse Ⅰ各加入3U,在37 ℃下酶切反应4h ;
加入接头后在 16℃连接10-12h;预扩增体系总体积为20μl,酶切连接产物为4μl;
将预扩增体系稀释20 倍后用于选择性扩增。
2. 从64 个EcoR Ⅰ和Mse Ⅰ引物组合中筛选出8 对条带清晰,多态性高的引
物, 8 对引物共扩增出92 个位点,其中多态性位点41 个,占总位点数的44.57% ,
每个引物组合扩增的位点数在9- 14 个之间。
3. 各个老化处理群体的 AFLP 分析结果显示:人工老化对扁蓿豆种子的生活
力虽然产生极显著影响,但对其种质的遗传完整性变化却未产生显著影响。此表明
扁蓿豆种质具有较强的遗传稳定性。
关键词:扁蓿豆;AFLP;人工老化;遗传完整性
System Establishment and Application of AFLP
In Medicago ruthenica L.
Abstract
AFLP marker is a new kind of molecular marker technique,which is widely applied
on the study of regenetic diversity, identification of germplasm resources and breeding.
AFLP was used for detecting the genetic intergrity of Medicago ruthenica L. in this
research for the first time. This research aimed at offering theoretical proof for
germplasm conservation and Construction of Molecular Genetic Map of Medicago
ruthenica L.. The main results were as follows :
1. A effective AFLP system was established. Thereinto, the template DNA dosage
was 100ng-600ng; in the digestion system, each of EcoR Ⅰand Mse Ⅰwas input 3U, the
reaction time was 4 hours in 37 ℃; the time of ligation reaction was 10-12h in 16℃; the
products of ligation was 4μl and the volume of the preamplification was 20μl; the
products of preamplification reaction was diluted to 20 times for selective amplification.
2. 8 pairs of primers selected from 64 primer combinations were identified to be
high polymorphic and were appl
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