家蚕尿苷二磷酸葡萄糖基转移酶基因的功能研究.pdfVIP

摘要 曼I I I, I 1|1 I—I!曼!曼曼曼曼曼曼曼曼皇曼曼 家蚕尿苷二磷酸一葡萄糖基转移酶基因 的功能研究 特种经济动物饲养专业博士研究生 黄飞飞 指导教师鲁成教授 摘要 糖基化作用在抑制和排除一系列内生和外源化合物的毒性方面起重要作用，尿苷二磷酸一 2．4．1．)参与催化这一反应。UGTs是一个多 糖基转移酶(UDP·glycosyltransferases，UGTs，EC 功能的超基因家族酶类，广泛分布于动物、植物、细菌和病毒中。UGTs的主要功能是将供体 活化单糖尿苷二磷酸一糖(UDP．glycosyl)的糖基转移到受体底物上，主要包括尿苷二磷酸一葡 acid)。使许多内生和外生的化合物发生糖基化作用， 尿苷二磷酸一葡糖醛酸(UDP—glucuronic 从而改变底物的性质，比如生物活性、溶解性和在细胞组织间转运的特性。UGTs主要分为植 UGTs，EC2．4．1．91)主要以UDP．葡萄糖作为糖供体，它使一系列化合物包括植物激素，植物 的二级代谢产物和异生素例如杀虫剂等发生糖基化作用。哺乳动物的UGTs 2．4．1．17)主要是以UDP．葡糖醛酸作为糖供体，它 (UDP-glucuronosyltransferases，UGTs，EC 在抵御潜在的外源化学物质的侵害方面起重要作用，此外也参与许多内源化合物的代谢和平 衡调节，包括胆红素和类固醇激素。与植物的UGTs相似，昆虫中的UGTs (UDP-glucosyltransferases，UGTs，EC 2．4．1．一)也是以UDP一葡萄糖而不是UDP．葡糖醛酸作为 糖供体。与哺乳动物相似，昆虫中许多内生和外源性化合物都发生了糖基化作用。昆虫中的 UGTs在很多生理学过程中起重要作用，包括使酶作用的底物发生糖基化作用，特别是解除植 食性昆虫食物中遇到的有毒的植物化合物的毒性方面起重要作用。此外还参与其它过程包括 角质层的形成，色素沉着和嗅觉作用等方面。昆虫杆状病毒基因组中一个编码蜕皮甾醇UDP． 葡萄糖基转移酶(ecdysteroidUDP-glucosyltransferase，EGT2．4．1．_)的基因e舀，是一个特殊的 糖基转移酶基因。杆状病毒感染昆虫后生成的EGT酶可以催化昆虫体内UDP．葡萄糖中的葡 萄糖基转移到蜕皮激素上，使蜕皮激素失活，从而阻滞寄主昆虫的蜕皮和化蛹，延长幼虫的 取食时间，以利于病毒自身的大量繁殖。 鳞翅目昆虫是农田的主要害虫，家蚕作为鳞翅目昆虫的模式生物，也是目前唯一完成全 两南人’≯博十学付论文 基冈组测序的鳞翅目昆虫。对家蚕UGTs基因进行全基因组分析与鉴定，不仅能为家蚕UGTs 自身功能的研究，特别是解毒机制以及食性等方面研究提供分子基础，更重要的是它也可以 为研究其它昆虫的UGTs基冈提供重要参考。 本研究利用家蚕的全基因组序列、ESTs数据以及基因芯片数据，对家蚕UGTs基因家族 进行了生物信息学分析和表达模式的研究，同时采用克隆、RT-PCR、原核表达、免疫组化和 真核表达等技术对该家族中的BmUGTOl3829基因的功能进行了探讨。本研究获得的主要结果 如下： 1．家蚕UGTs基因的生物信息学分析及表达模式的研究 利用9×家蚕基因组数据，通过生物信息学分析，我们在家蚕基因组中共鉴定出了42个UDP． 葡萄糖基转移酶基因，通过EST数据和基因芯片分析，总共有36个基因有表达证据。其中只有 2个基因已有报道，其余40个基因为本研究首次鉴定。同其它昆虫相比，家蚕的UGTs基冈数目 明显增加(我们用同样的方法在按蚊中鉴定了22个UGTs基因，在蜜蜂鉴定了12个UGTs基因， 已报道果蝇中有33个UGTs基因)。系统发生分析结果表明，家蚕基冈组中存在有三群特有的 家蚕特有的UGTs基因，这可能是家蚕与它唯一的取食植物——桑叶之间长期相互竞争的结果。 所鉴别