广西巴马小型猪gfap-dsred转基因克隆胚胎的构建研究.pdfVIP

摘要 广西巴马小型猪是我国特有的小型地方猪品种，其体格微小，器官大 小及生理特征与人类比较接近，是理想的医学动物模型。胶质纤维酸性蛋 白(Glial Fibrilla巧Acidic 主要成分，并且是该细胞所特有的成分，因而被广泛用于星形胶质细胞的 一个DsRed编码序列和一个博莱霉素抗性基因，它能够在星形胶质细胞 素抗性基因)能够在成纤维细胞中稳定表达。我们先用pEGFP．N1载体对 转染条件进行优化，然后在优化后的条件下转染并筛选出pEGFP-N1和 方法构建转基因克隆胚胎，为广西巴马小型猪转基因克隆的研究打下基 础。 本研究对细胞敏感性进行了检测，并对转染的条件进行了优化，接着 在此基础上摸索了转基因胚胎的构建条件，现将主要结果归纳如下： 能够在7天内将细胞全部杀死，由此将转基因阳性克隆筛选的药物浓度分 别定为G418，600耀．／ml；Zeocin，300嵋／ml。 2对转染条件进行了优化，在脂质体量为：1．25山，质粒量 体．质粒复合体曝露时间为6h时转染效率最高，为28．05％。 出了三批pEGFP-N1转基因细胞，四批h咖一DsRed转基因细胞。 4在hG吼心-DsRed转基因克隆胚胎的囊胚率上：①激活脉冲次数1 pulse组和2 pulses组 (29．81％or 30．oo％vs13．85％，6．48％)，3 pulses组显著高于4pulses组， 但1pulse组和2 胚发育率显著高于NCSU-23(28．70％vs12．37％，Po．05)；③非转基因 23．18％or 发育率之间(24．81％vs 25．37％)无显著差异。 匀后立即添加到培养孔内并放入培养箱，曝露6小时即可获得较高的转染 效率；用600删的G41 培养液，采用2次脉冲激活， h删．DsRed转基因胚胎的体外发育能力 最好，但在转基因和非转基因胚胎之间没有显著差异。 关键词广西巴马小型猪肾脏成纤维细胞脂质体法转染效率阳性筛选 U 转基因克隆 m hGFAP—DsReD OF S1’UDYSONT砸CONSTIU丁CTICIN AMAM吸盯-PIG EMBRYOSOFGUANGⅪB TRANSGENIC ABSTRACT miniature miniatureisa endemic pig GuaIl西B锄a pig uIlique锄d Characterofsmall and breedsof o玛ans ChiIl钆fIorⅡle somatotype，the t0 it’saidealmedical ch跚acteristicsclosehllII姗，so physiological Very am血a11d material model．Glial