水牛bmp-1与gdf-9基因5#39;调控序列的克隆与分析.pdfVIP

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2016-02-27 发布于贵州
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水牛bmp-1与gdf-9基因5#39;调控序列的克隆与分析.pdf

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水牛bmp-1与gdf-9基因5

水牛BMP-15与GDF-9基因5’调控序列的克隆与分析摘要为研究水牛BMP．15与GDF．9基因在卵泡发生过程中的表达模式，本研究克隆了BMP一15与GDF．9基因调控序列并进行了细胞水平的表达验证。参照牛的BMP．15与GDF．9基因组序列设计多对引物，以本地水牛基因组因调控序列片段，经测序正确后插入pEGFP．1载体，构建EGFP报告载体，用于转染不同组织源细胞，以检测调控序列的活性及组织特异性表达情况，结果总结如下： 1．克隆获得了水牛BMP．15基因5’调控序列。克隆的序列为4．6kb，翻译起始位点上游序列与黄牛相应序列相似性为98％。为研究不同区段的启动基因转录活性，我们对调控序列进行了分段克隆，获得包括B4．6、BTL、表达，而在水牛胎儿成纤维细胞和猪胎儿成纤维细胞中无启动EGFP转录的活性。 2．克隆获得了水牛GDF．9基因5’调控序列。克隆的序列为3．7kb，包译起始位点上游序列与黄牛相应序列相似性高达98％。同样，为研究不同区段的启动基因转录活性，我们对调控序列进行了分段克隆，获得G3．7、中启动绿色荧光蛋白表达，而在水牛胎儿成纤维细胞和猪胎儿成纤维细胞中无启动EGFP转录的活性。上述结果表明，水牛BMP．15和GDF．9的基因启动活性区域分别位于的表达，而不能启动EGFP在水牛胎儿成纤维细胞和猪胎儿成纤维细胞中的表达，推测两段调控序列可能为组织细胞特异性启动子。关键词：水牛BMP．15GDF．9调控序列克隆分析 CLONINGAND CHARACTERIZATION ANALYSIS THE 5’REGULATION FRAGMENT OF BUFFALO BONE MORPHOGENETIC PROTEIN．15 AND GROWTH DIFFERENTIATION FACTOR-9GENE ABSTRACT To the of 1nVestlgateexpression BMP一15and pattern GDF．9 inwater gene buffalo follicular during of genesis，the BMP．15 regulation andGDF．9 region wasclonedand thefunctionof theDNA were fragmentsverifiedincelllevel．