水牛抑制素α基rnai载体构建与沉默效率检测.pdfVIP

水牛抑制素a基因lⅢAi载体构建与沉默效率检测 摘要 抑制素(I出bill，INH)通过反馈作用抑制促卵泡素的合成与分泌， 影响动物的卵泡发育和排卵。为探讨应用RNAi技术沉默IN】阻a基因 提高水牛繁殖力的可行性，本研究构建了水牛抑制素a亚基的RN础 载体，并在细胞水平对其沉默效率进行了检测。 neo载体为骨架，设计并构建了 1．以pSliencer4．1．CMV pSliencer4．1-l Ol3 质体法转染水牛颗粒细胞，48 h后应用实时荧光定量PCR(qRllPCR) 抑制效率分别为58．8％、44．9％、67．4％和43．9％，145位点无抑制效果。 h、 h、48 选择抑制效率最高的pSliencer4．1．1013转染颗粒细胞，检测24 72 h和96 h后的抑制效率表明基因沉默具有时效性，转染48h后抑制 效率最高，此后逐渐减弱。 批量快速测定法(LaSl玎)测定病毒滴度达到4×107H，／mI，，用病毒 感染水牛颗粒细胞72 h后，qImPCR检测小JH．0【的抑制效率为26．8％。 3．探讨了应用micr0I斟A原理进行卵巢组织特异性沉默水牛 仆jH的可行性。设计并构建了2个以pEGFP．Cl为骨架基于内含子 ．1013。转染颗粒细胞48 有49．4％的抑制效率，而pEGFP．C1．18a-1013未表现抑制作用。 上述结果表明：筛选得到的水牛仆眦一a基因308、769、1013和 1053四个s枞核心序列位点能有效抑制仆m．a的表达，其中1013 心胁a沉默的转基因水牛。 关键词：水牛抑制素RN赴sh砌呵A慢病毒micro砌蛆 Ⅱ DETECTIoNoFRNA CONSTRUCTIONAND VECTORSFORSILENCING INTERFERENCE BUFFALolNHIBIN0【．SUBUNITGENE ABSTRACT InhibmcouldinnuenCea11imal’sfollicles a11doⅦlation devel叩ment feedbaCk aIldsecretionofFSH．To the by suppress啦syn也esis explore buf3Falo’s D盯H feassibili够of主11creasingr印roductiVi够bysilencing a．subuIlit vectorSforbu胁lo’sn唧-a geneus№RNAitechnolo鼢IⅢAi iIl were e衔cienciesweredeteminedcell conStructed，and gene silencing leVeli11tllis study． 1．With