嗜肺军团菌环介导等温扩增快速检测方法的建立与应用.pdfVIP

生堡煎堡塞堂塑查!坚堡!旦笙!里鲞笙!塑￡垄些!墅i堂堂垡!!!型!Q塑!塑!：!壁!坐：! ·48l· ·实验室研究· 嗜肺军团菌环介导等温扩增快速检测方法的 建立与应用 朱水荣王志刚 张政卢亦愚梅玲玲 占利 【摘要】 目的建立一种适合基层检验部门及小型实验室使用的快速检测嗜肺军团菌的方法。 方法应用环介导等温扩增技术(LAMP)，针对嗜肺军团菌mip基因设计5条引物(2条内引物、2条外 引物及1条环引物)，并对LAMP反应条件和反应体系进行优化。为验证该方法的特异性、敏感性，针 对种系背景明确的12株嗜肺军团菌实验对照菌株、45株嗜肺军团菌地方分离株、6株非嗜肺军团菌、 1l株其他细菌以及59份外环境水样本进行检测，并将其结果与传统培养分离方法及定量PcR方法比 较。结果所检测的菌株样本中不同血清型嗜肺军团菌经I，AMP检测均呈绿色为阳性，非嗜肺军团 菌及其他菌株检测均呈橙色为阴性。实验结果表明，LAMP方法的检出率高于传统培养分离方法及 定量PcR。应用该方法从菌株核酸的提取至检测完成仅需1．5h左右，该体系检测灵敏度为5cfh／皿， 而且其检测结果在日(灯)光下通过肉眼即可判断。结论实验建立的LAMP方法能够快速、灵敏、特 异地检测嗜肺军团菌，适合基层检验部门及小型实验室与现场监测等使用。 【关键词】 嗜肺军团菌；环介导等温扩增技术；建立与应用 fbr EstaMislIm蛐t蛐dof n地出od r丑piddeta!跏 appU伪60nlo卅pmediatedisom唧m蛐pHfi训on zHU 磺kgionellne唧lophil口sh癖ro昭，WANGzhi-g帆g．zHANGzkng。LUYt一弦。MElKng-1吨， Z矾|7＼『n Zk‰疵妣矿M打D6谢啊，Zk枷增ce舭r_，浙D妇∞ecomrol口以胁肥mkm，肌嘴知u 310051．Chim T0 a 【Ahtmct】Objectiwdevelop100p-media自edisath明nal锄plification(LAMP)meIl州fbr t11e insmall·scale mpiddia印osingof上馏勃聊三kp，le加砌池inPamog印DetectionD印鲫哑印t(PDD)or a theI，AMP labo船t0辑MethodsFiveprimers(2I蚰crPIime巧，2O咖rP曲ers姐dL00pPrim盯)f．or tesm tllc of ofu蝴Preactionw嬲 we化desi印edbytargeting reac“伽sy咖m m咖g朗eLp聊Ⅱ舢曲池锄d sn_ains 州”imized．12s舰insofLp，圮l￡m卯^i缸，45localstmins，6non．Lp，记删础i缸s嘲ns，11other and59朗viro咖即talwatersa皿Ipleswere釉lyzedtoevaluatethespecifici四andsensibili婶ofmeLAMP meLAMP wim cuh∽ 锄Dlification．Atthesa枷屺time，theresultsof we托alsocompa陀dbiochemical 柚d PCRmetllods．R嚣llI缸 qu锄titative 111e锄plific撕∞pmductsof厶p聊H，，印^池t啪edgre