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问号钩端螺旋体lipL41基因表达及重组抗原分析.pdf
·实验研究·
问号钩端螺旋体zi乡L41基因
表达及重组抗原分析
阮萍严杰毛亚飞 彭慧琴周晓辉
【摘要】 目的 构建问号钩端螺旋体(钩体)z培k培f批4l/1融合基因及其原棱表达系统。
z
方法采用连接引物聚合酶链反应(PcR)构建,出一,,pL41/l和ffnz户7。41/1融合基因,常规方法构建其
原核表达系统。采用十二烷基磺酸钠聚而烯酰胺凝胶电涑检测目的重组蛋白rLTⅡr1.zpL41/1和
rcTB_rL』pL41/l表达情况;用免疫印迹和神经节苷脂酶联免疫吸附试验(GM,一ELIsA)分别检测上述
目的重组蛋白的免疫缘性和佐剂话性;采用PcR和显微镜凝集试验(MAT)分别检测97株问号钩体
野生株Iz址4l/l基因及其表达情况;用ELlsA检测228例钩体患者血清fz卢L41基因产物的抗体。
结果与报道的相关序列比较,ffBfz乩4l/l和c}B£一声L41n融合基因核苷酸和氨基酸序列相似性分
6%一99
别为99 9%和998%~100%。T■rBrLlpI,41/1和r(:TB、rLipL4l/l表达产量均约为细菌总蛋
白的10%,主要以包涵体形式存在。rLlB儿lpL4L/1和以TBrLipL4l/l均分别能与rupL4l/l兔抗血
5%(82/97)向号钩体野生株
清和牛GM.结台。876%(85/97)问号钩体野生株含有fi止41基因,84
6%(193/
分别与rL岫L41/l和rLipL41/2兔抗血清出现效价范围为l:4~1:128的MAT阳性结果。84
成功地构建了,£凸
228)和78.5%(179/228)的患者血清分别rLlpL4IfI和rLipL41/2抗体阳性。结论
合蛋白有良好的免疫原性和佐剂活性。,i声L4l基因存在于不同问号钩体血清群中并高频率表达。
rLTB—rLipL4l/1和rcTB-rLipL4l/1具有成为钩体属特异性疫苗抗原的良好前景。
【关键词】问号钩端螺旋体;融合基因;分析
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Identmcatjonjn蛐unogenicac㈣ty rLTB/cTB-LipI.41/ltoL印觚pim删Pr7唧Hs
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【Abstract】 prokaryotic sptemsof如开/cfR,z户L41/I
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