霍乱毒素B亚单位与志贺毒素2B亚单位融合表达及抗原性检测.pdfVIP

·378· 实验室研究· 霍乱毒素B亚单位与志贺毒素2B亚单位 融合表达及抗原性检测 李振军 孙强正 景怀琦徐建国 【摘要】 目的 克隆表达出血性大肠埃希菌(EHEc)0157：H7志贺毒素2B亚单位(stx2B)与霍 乱毒素B亚单位(CTB)的融合蛋白(CTB—Stx2B)，并检测其抗原性和与神经节苷脂((；M1)结合能力。 方法 设计引物扩增融合蛋白CTB—Stx2B的编码基因c￡6一耽r26，T—A克隆测序验证后克隆入原核表 纯化，获得目的蛋白CTB—St)【2B，sDS—PAGE和western-blot检测其抗原性和形成五聚体的能力； GMl一ELIsA法检测其与GMl结合能力。结果扩增出约750 bp的目的片段，测序鉴定与设计序列 一致；原核表达质粒pET30a(十)一c￡6一s￡z26转化E．∞训BL21(DE3)后，经酶切和PcR扩增鉴定正确； 检测CTB．St】【2B能与CTB单克隆抗体结合，纯化产物经复性后大多以五聚体形式存在；ELIsA检测 cTB．St】(2B具有结合GMl活性。结论成功克隆、表达了融合蛋白cTB—St)(2B；表达的蛋白具有良 好的CTB抗原性和GMl结合能力。 【关键词】肠出血性大肠埃希菌0157：H7；志贺毒素2B亚单位；霍乱毒素B亚单位；抗原性 Cloneand c曲-s船2舀fusionin toxin2B express geneEn胞roh删，，矗n∥c删c庇er把危缸∞豇0157：H7 Shigeal andV subunitIcholeratoxinBsubunitandthedetectionoftheir SUN immuno翟enicityL工．；魏g挖一；鲜，2， Sf盘￡8 Dis∞s已PrBz肥咒￡iD咒血托d Qin咒g一2赢P咒g，，JNG，H乱ni·qi，XUJi＆咒一g“o． KeyLn60，。口￡07‘y如rj恕血￡io“s Cb咒￡加Z，N岔￡io，z口Zhs胁“抬加r[=Dmm甜咒ic口6如Dis∞卵CD牡￡r0Z彻dP他御咒￡io起，C矗：扎伽咒￡er加rDis∞即 GD咒￡roZn咒dPrPt圯心￡io咒，BP巧i咒g102206，China C0r椰加粗矗i增口“￡hoj。：XUJi口托一g“o，Email：xujianguo@icdc．cn clone 【Abstract】 To and thefusion objective express geneencodjngE札￡Pro矗已mr砌口g站酷c^8ric^缸 2B B ∞如0157：H7(EHEC0157：H7)Shigelatoxinsubunit(Stx2B)andvibriocholeratoxinsubunit wellastodetectthe and offusion To (CTB)as immunogenicityGMl南indingability protein．Methods a to 5￡z26 andc￡6—5妃26fusion Stx2BandCTB．Stx2B designprimeramplify gene geneencoding andt。clonethe into in ordertoconstruct re