微量凯氏定氮法.ppt.pptVIP

微量凯氏（Mirco-Kjeldahl）定氮法 目 的 1、学习微量凯氏定氮法的原理 2、掌握微量凯氏定氮法的操作技术，包括标准硫酸铵含量的测定，未知样品的消化、蒸馏、滴定及其含氮量的计算等。 原 理 （消化、蒸馏、滴定、计算） 凯氏定氮法常用于测定天然有机物（如蛋白质，核酸及氨基酸等）的含氮量。 天然的含氮有机物与浓硫酸共热时，其中的碳、氢二元素被氧化成二氧化碳和水，而氮则变成氨，并进一步与硫酸作用生成硫酸铵。此时程称之为“消化”。 （但是，这个反应进行得比较缓慢，通常需要加入硫酸钾或硫酸钠以提高反应的沸点，并加入硫酸铜作为催化剂，以促进反应的进行。） 浓碱可使消化液中的硫酸铵分解，借水蒸汽将产生的氨蒸馏到一定的量和浓度的硼酸溶液中（紫红色），硼酸吸收氨后（绿色），氨与溶液中的氢离子结合，生成铵离子，使溶液中氢离子浓度降低。然后用标准无机酸滴定，直至恢复溶液中原来氢离子浓度为止（紫红色），最后根据所用标准酸的摩尔数（相当于待测物中氨的摩尔数）计算出待测物中的氮量。 器 材 1、改良型凯氏定氮仪 2、10mL微量酸式滴定管 3、酒精灯（打火机） 4、凯氏烧瓶 5、锥形瓶（50~100毫升）、容量瓶（50毫升） 试 剂 1、0.1mg/mL 标准（NH4）2SO4 2、30% NaOH溶液 3、2%硼酸 4、标准HCl （0.0100M） 5、混合指示剂（田式指示剂） 操作步骤 （样品的处理、消化时间长，略） 1.熟悉改良型凯氏定氮仪构造原理，滴定管的使用 2. 蒸馏器的清洗（将蒸汽发生器废水换掉，主要清洗反应室） ⑴ 取3个50mL锥形瓶编号，各准确加入5mL硼酸（内加混合指示剂1-2滴），呈淡紫色。表面皿覆盖备用。 ⑵ 先将夹子② 打开缓慢接上冷水，向蒸汽发生器（A球）中注入3/4球体的水，将夹子①②③全关上，将水烧开，然后在加样漏斗中加入少许蒸馏水到反应室（B球）中，B球中水将自动吸到A球；或者将酒精灯挪开；或者将夹子②打开放入少许冷水，都将使反应室中的水自动吸出，反复清洗3次。 3. 蒸馏样品 ⑴ 打开夹子③放掉部分热水，并补充适量冷水，将冷凝管出口下端浸入第2个硼酸及指示剂的锥形瓶的液面下。打开夹子①，用移液管取5mL （NH4）2SO4 缓慢加入反应室，再加入5mL NaOH，关闭夹子①，并在加样漏斗中加入少许蒸馏水做水封。关闭所有夹子，缓慢打开冷凝水，开始加热蒸馏 ⑵ 当观察到锥形瓶内溶液由紫变绿时，开始计时蒸馏3分钟，然后提高冷凝管出口离开液面1cm 高，同时用少许蒸馏水冲冷凝管出口外侧，继续蒸馏1 min后 移走锥形瓶，用表面皿覆盖，等待滴定。 ⑶ 清洗反应室：放掉发生器中废水，按照步骤2（2）操作，最后将蒸汽发生器中废水全换了，并加热使蒸汽通过整个装置数分钟 4. 蒸馏空白 ⑴ 操作如蒸馏样品，空白不加（NH4）2SO4，而是5mL蒸馏水及5mL NaOH ⑵ 第3个锥形瓶收集完后，清洗反应室，放掉废水，操作按照3（3） 5. 滴定 用标准盐酸溶液滴定第2，3两只锥瓶内溶液，当硼酸溶液刚由绿变回淡紫色时为滴定终点，记录所用盐酸的量。 6. 计算 C —— 标准HCl的浓度 0.01M V1 —— 滴定样品消耗标准HCl平均mL数 V2 —— 滴定空白消耗标准HCl平均mL数 V —— （NH4）2SO4样品体积（mL） * * 滴定时用甲烯蓝和甲基红混合指示剂，其指示范围为pH5.2~5.6，将NH4H2BO3的绿色滴至原来H3BO3的紫红色即为终点。 本法适用范围0.2~1.0毫克氮。相对误差应小于2%。 夹子1 夹子2 夹子3 图 凯氏微量定氮蒸馏装置 最后一次可用硼酸检测：将冷凝管出口下端浸入第1个硼酸及指示剂的锥形瓶的液面下，蒸馏数分钟，观察颜色变化，若不变色则洗净。（注：先挪开锥形瓶，再挪酒精灯，防锥形瓶中液体被倒吸） （NH4）2SO4样品含N量（mg/mL）= C (V1-V2) ×14 / V 代入上式得： （NH4）2SO4样品含N量（mg/mL）= 0.01 (V1-V2) ×14 / 5 *