Kisspeptin-10对无血清培养鸡F1级卵泡颗粒细胞孕酮分泌的影响及机制研究.pdfVIP

中国农业科学 2012,45(2):391-398 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2012.02.023 Kisspeptin-10对无血清培养鸡F 级卵泡颗粒细胞 1 孕酮分泌的影响及机制研究 肖蕴祺，黄炎冰，吴 晶，倪迎冬，赵茹茜 （南京农业大学动物医学院，南京 210095 ） 摘要：【目的】研究kisspeptin-10对无血清培养的鸡卵泡颗粒细胞孕酮分泌的作用及可能机制。【方法】选 取 200 日龄处于产蛋高峰期的伊莎蛋鸡，于排卵前剖腹收集 F1 卵泡，分离纯化颗粒细胞，于含胎牛血清培养基中 培养 24 h，换成无血清培养基稳定培养 24 h 后，用不同浓度的 Kp-10、U73122、EGTA 等单独或共同处理细胞， 收集细胞上清，放射免疫学方法检测培养基中孕酮含量。【结果】（1）通过免疫细胞化学方法，显示颗粒细胞上有 Kp-10 免疫活性样物质的阳性表达；（2）Kp-10 处理可显著增加无血清培养的颗粒细胞的活力，100 nmol·L-1 时可 显著促进孕酮的分泌（ -1 P ＜0.05）；（3）与对照组相比，2 μmol·L U73122（磷脂酶C抑制剂）对孕酮的分泌无显 著影响（ -1 P ＞0.05），而 0.5、2 μmol·L U73122 能显著降低 Kp-10 对孕酮分泌的促进作用（P ＜0.05）；（4） 钙离子阻断剂Verapamil（1—100 μmol·L-1 -1 ）呈剂量依赖性降低孕酮的分泌，于100 μmol·L 时达显著降低水平 （ -1 -1 -1 P ＜0.05）；与1 μmol·L Verapamil单独处理组相比，100 nmol·L Kp-10与1 μmol·L Verapamil同时处理 可显著增加孕酮的分泌，而与 10、100 μmol·L-1 Verapamil共同处理不能逆转其对孕酮分泌的抑制作用（P ＞0.05）， 且胞内钙离子含量与上清液中孕酮分泌水平相一致；（5）与100 nmol·L-1 -1 Kp-10处理组相比，1和5 mmol·L EGTA 共同处理时孕酮分泌显著降低，当再加入1.5 mmol·L-1 2+ Ca 时孕酮分泌量显著增加。【结论】Kp-10促进体外培养 的鸡卵泡颗粒细胞孕酮的分泌，其机制可能与胞内Ca2+信号通路有关。 关键词：kisspeptin-10；钙离子；孕酮；颗粒细胞；伊莎褐蛋鸡 Effect and Mechanism of Kisspeptin-10 on Progesterone Secretion in Granulosa