KT_HAK_KUP家族基因在桃开花期的表达及对钾肥施用的响应.pdfVIP

中国农业科学 2015,48(6):1177-1185 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2015.06.13 KT/HAK/KUP家族基因在桃开花期的表达及对钾肥施用的响应 宋志忠，郭绍雷，马瑞娟，俞明亮 （江苏省农业科学院园艺研究所/江苏省高效园艺作物遗传改良实验室，南京 210014 ） 摘要：【目的】从转录水平探索KT/HAK/KUP 家族基因在桃花发育不同时期的表达模式及对钾肥施用的响应特 征，明确关键基因并验证其功能。旨在揭示钾素营养状况与桃花开放之间的直接关系，为果树施钾及高效园艺作 物的遗传改良与育种提供理论依据。【方法】以‘霞晖6 号’桃树为研究对象，通过钾肥施用分析其对桃花生长发 育、钾素含量及花朵开放时期的影响；通过 HNO -HClO 法消化样品，利用 ICP-AES 设备测定桃花开放不同时期的 3 4 钾离子含量；利用荧光实时定量qRT-PCR 技术，分析KT/HAK/KUP家族基因在桃花开放不同时期的表达水平，确定 主效基因；进一步通过qRT-PCR技术分析KT/HAK/KUP家族基因在桃花开放不同时期对钾肥施用的差异响应；利用 异源细菌缺失功能互补法验证主效基因的功能，将 KUP11 的 CDS 序列克隆到 pPAB404 中形成重组表达载体 pPAB404-KUP11，测序验证的重组载体转化到大肠杆菌功能缺失突变菌株TK2420中，分析重组载体pPAB404-KUP11 + 恢复 TK2420 突变细菌吸收外界 K （KCl 或 KSO ）的功能。【结果】钾肥施用使‘霞晖 6 号’桃花提前 2 d 开放， 2 4 并显著促进了盛开期桃花的发育，花朵鲜重增加 21.5%。此外，盛开期桃花 K+含量也最高，其次是初开期和花蕾 期，败落期则最低。因此，钾肥施用显著增强了桃花开放过程中花朵 K+ 的富集水平，在花蕾期、初开期、盛开期 和败落期分别提高了 24.3%、27.4%、29.1%和 26.2%。KUP1—13 在桃花开放不同时期的表达水平存在差异，但在 盛开期的表达水平均达到最高，且在转录水平对钾肥施用的响应不同。KUP1 和 KUP5 基因对钾肥施用最为敏感， 其表达水平从花蕾期至桃花盛开期是持续被诱导的；KUP11 在桃花开放的整个过程中表达量最高，钾肥处理显著 诱导了其在花蕾形成初期的表达并抑制了其在桃花败落期的表达量。表达载体pPAB404-KUP11 能恢复 TK2420细菌 重新吸收 K+ + ，且对外界 KCl 和 K SO 均有吸收，说明 KUP11 的表达水平与 K 的吸收呈正相关性。【结论】钾肥施用 2 4 促进桃花发育，改善钾营养状况，催使桃花提前开放，并对 KUP 家族基因在开花不同时期转录水平的调控有差异； KUP11转运体具有吸收外界K+ 的功能，在桃花开放过程中起重要作用。 关键词：桃；开花；钾；KT/HAK/KUP；钾素平衡 Analysis of Expression of KT/HAK/KUP Family Genes and Their Responses to Potassium Fertilizer Application During Peach Flowering SONG Zhi-zhong, GUO Shao-lei, MA