piggyBac转座子在绒山羊基因组中的整合位点及其特征分析.pdfVIP

中国农业科学 2012,45(5):958-965 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2012.05.017 piggyBac转座子在绒山羊基因组中的整合位点及其特征分析 1,2 1 1 3 1 白丁平 , 方 堃 , 杨明明 , 屈 雷 , 陈玉林 1 2 3 （西北农林科技大学动物科技学院，陕西杨凌 712100； 新疆农垦科学院畜牧兽医研究所，新疆石河子 832000；榆林学院陕西省陕北绒山羊工程 技术研究中心，陕西榆林 719000 ） 摘要：【目的】构建piggyBac （PB）转座子表达载体系统，研究PB 转座子在绒山羊基因组中的整合位点。【方 法】构建pB-CMV-EGFP-Neo 转座载体和pcDNA-Trans 辅助载体，利用lipofectamine 2000 介导共转染绒山羊胎儿 成纤维细胞，经G418 筛选获得稳定转染的转基因细胞系。提取转基因细胞基因组DNA，利用反向PCR 检测piggyBac 转座子整合位点。【结果】构建了转座系统并成功介导外源基因在绒山羊成纤维细胞染色体中整合，获得了转基因 细胞系；反向PCR 检测显示在绒山羊基因组中有21 个PB 转座子整合位点；整合位点TTAA 毗邻一侧的5 个碱基组 成中，PB 转座子3′倾向于插入到富含AT （58.35%）碱基的区域，PB 转座子5′倾向于插入到富含GC （57.8%）。【结 论】PB 转座子可在绒山羊基因组中发生高效转座，获得的整合位点信息可为利用 PB 转座子开展绒山羊研究提供 理论参考。 关键词：piggyBac; 绒山羊; 基因组; 整合位点 Integration Sites and Their Characteristic Analysis of piggyBac Transposon in Cashmere Goat Genome 1,2 1 1 3 1 BAI Ding-ping , FANG Kun , YANG Ming-ming , QU Lei , CHEN Yu-lin 1 2 ( College of Animal Sciences and Technology, Northwest A ＆F University, Yangling 712100, Shaanxi; Animal Husbandry and Veterinary Institute, Xinjiang Academy of Agriculture and Reclamation Science, Shihezi 832000, Xinjiang ; 3Shaanbei Cashmere Goats Engineering Technology Research Center of Shaanxi Province, Yulin College,Yulin 719000, Shaanxi) Abstract: 【Objective 】 The objective of the experiment was to construct pig