POMC在不同毛色绵羊皮肤中的表达与定位.pdfVIP

中国农业科学 2015,48(9):1818-1824 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2015.09.15 POMC在不同毛色绵羊皮肤中的表达与定位 1 1 1 1 2 1 马淑慧 ，李亚楠 ，赫晓燕 ，王海东 ，杨 磊 ，董常生 1 2 （山西农业大学动物科技学院，山西太谷 030801 ； 山西农业大学信息学院，山西太谷 030801 ） 摘要：【目的】对不同毛色绵羊皮肤中的阿黑皮素原（proopiomelanocortin，POMC）进行定位和表达差异分 析，确定 POMC 与毛色形成的关系，进一步丰富有关哺乳动物毛色形成机制的理论知识。【方法】选取年龄相近的 雄性黑色和白色成年绵羊各 3 只，用取皮器分别在臀部采集皮肤组织 3 块，对其中一块制作石蜡切片后采用免疫 组织化学法确定POMC在不同绵羊皮肤中的定位，另两块置于液氮中冻存后分别提取皮肤总RNA和总蛋白，总RNA 经反转录成cDNA后，经NCBI 分析比对后设计POMC特异性 PCR引物，采用 QRT-PCR方法检测POMC基因在 mRNA 水 平的表达差异；总蛋白经 SDS凝胶电泳后，采用 Western blotting 方法加入 POMC 多克隆抗体检测 POMC 在 蛋白水平的表达差异，得出的数据用SPSS19.0软件进行差异显著性分析，探讨POMC对毛色形成机制的调控作用。 【结果】免疫组织化学结果显示POMC在黑色和白色绵羊皮肤中均有表达，且表达部位都位于毛囊根鞘周围和表皮 的皮肤角质形成层细胞内；QRT-PCR结果显示POMC在黑色绵羊皮肤中mRNA的相对表达量为2.5004±0.2577** ，而 在白色绵羊皮肤中POMC的mRNA的相对表达量为1.0032±0.0350，黑色绵羊皮肤中POMC 的mRNA的相对表达量为 白色绵羊皮肤的 2.5 倍，二者表达差异极显著（P ＜0.01）；Western boltting 结果显示黑色绵羊皮肤 POMC 蛋白 水平相对表达量为1.5253±0.0426* ，而白色皮肤中POMC蛋白水平相对表达量为1.0005±0.0180，黑色皮肤POMC 蛋白表达量是白色皮肤的1.55倍（P ＜0.05），两者差异显著。【结论】试验表明POMC可在黑色和白色绵羊皮肤中 正常表达，且其表达位置一致，但 POMC 在不同毛色绵羊皮肤组织中 mRNA 和蛋白的表达水平存在一定的差异，表 明POMC的表达量变化会在一定程度上影响毛色的生成。 关键词：绵羊；POMC；Western blotting；免疫组织化学 POMC Expression and Localization in Sheep Skin with Different Coat Color 1 1 1 1 2 1 MA Shu-hui , LI Ya-nan , HE Xiao-yan , WANG Hai-dong , YANG Lei , DONG Chang-sheng 1 ( College of Animal Science and Veterinary Medicine, Shanxi Agricultural University, Taigu 030801, Shanxi; 2Col