白菜型冬油菜铁超氧化物歧化酶（Fe-SOD） 基因的克隆及表达分析.pdfVIP

中国农业科学 2013,46(21):4603-4611 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2013.21.024 白菜型冬油菜铁超氧化物歧化酶 （Fe-SOD） 基因的克隆及表达分析 1,2 1, 3 2 1 1 1 1 1 1 曾秀存 ，孙万仓 ，孙 佳 ，许耀照 ，方 彦 ，史鹏辉 ，杨 刚 ，孔德晶 ，武军艳 ，刘自刚 1 2 3 （甘肃农业大学农学院，中国兰州 730070； 河西学院农业与生物技术学院，中国甘肃张掖734000 ；Department of Plant Sciences ，University of Saskatchewan，Saskatoon，Saskatchewan，Canada S7N5A8 ） 摘要：【目的】了解SOD 酶蛋白家族 Fe-SOD 在超强抗寒冬油菜中的表达情况及其在低温胁迫下的作用。【方 法】采用RT-PCR 技术克隆超强抗寒白菜型冬油菜陇油7 号Fe-SOD 的cDNA 序列。对该序列进行生物信息学分析， 采用半定量以及相对定量RT-PCR 研究Fe-SOD 在低温胁迫下的表达模式，采用氮蓝四唑（NBT ）光还原法测定冬油 菜叶片和根中的总SOD 酶活性。【结果】获得Fe-SOD，GenBank 登录号为KF178713，该基因cDNA 片段全长645 bp， 包含一个639 bp 完整的开放阅读框，编码212 个氨基酸的蛋白质，与白菜(Chiifu)的蛋白质氨基酸序列同源性高 达99%。该基因编码的酶蛋白是1 个主要由α-螺旋组成的亲水性稳定蛋白，无信号肽，无跨膜结构域。Fe-SOD 表 达模式分析显示初期低温胁迫下（4℃），该基因上调表达，继续低温胁迫处理（-4℃和-8℃），Fe-SOD 表达量受 到抑制。总SOD 酶活性测定显示冬油菜根中酶活性高于叶片，以利于冬油菜安全越冬。【结论】从白菜型冬油菜克 隆的Fe-SOD 具有已知物种Fe-SOD 的特征。Fe-SOD 在冬油菜品种陇油7 号抗寒过程中起作用。 关键词：白菜型油菜；低温；Fe-SOD；表达分析；SOD 活性 Cloning and Expression Analysis of Fe Superoxide Dismutase (Fe-SOD) Gene from Winter Turnip Rape (Brassica rapa L.) 1,2 1 3 2 1 1 ZENG Xiu-cun , SUN Wan-cang ，SUN Jia , XU Yao-zhao , FANG Yan , SHI Peng-hui , 1 1 1 1 YANG Gang , KONG De-jing ,WU Jun-yan , LIU Zi-gang 1 2 ( Agricultural College, Gansu Agr