胞囊线虫侵染后小粒黑豆抑制消减杂交cDNA文库的构建及EST分析.pdfVIP

中国农业科学 2012,45(6): 1106-1115 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2012.06.008 胞囊线虫侵染后小粒黑豆抑制消减杂交cDNA 文库的构建及EST 分析 1,2 1 1 1 1 1 王 芳 ，段玉玺 ，陈立杰 ，王媛媛 ，朱晓峰 ，王 东 1 2 （沈阳农业大学植物保护学院，沈阳 110866； 黑龙江省农科院齐齐哈尔分院，黑龙江齐齐哈尔 161006） 摘要：【目的】研究胞囊线虫侵染后大豆根部早期基因表达情况，从分子水平探索大豆的抗病机制。【方法】 以抗大豆胞囊线虫（Heterodera glycines）3 号生理小种的小粒黑豆（Glycine max）为材料，利用抑制消减杂 交（suppression subtractive hybridization，SSH）技术，构建大豆胞囊线虫诱导大豆根部早期表达的SSH-cDNA 文库，并结合反向Northern 斑点杂交筛选阳性克隆。【结果】获得280 个表达序列标签（EST），经 CAP3 软件聚 类拼接，得到166 个unique EST，在GenBank 进行Blastn 与Blastx 同源比对，有119 条EST 与已知蛋白或基因 具有不同程度的同源性，占全部EST 的83%，已知基因功能的EST 涉及信号识别和传导、能量与物质新陈代谢、 膜及转运、木质素和类黄酮的生物合成、抗病防御、细胞保护和转录调控。【结论】本研究在大豆胞囊线虫侵染早 期发现了表达频率较高的基因如过氧化氢酶、泛肽素、几丁质酶、脂肪氧合酶、水通道蛋白、成熟调控蛋白、金 属硫蛋白、脂膜嵌入蛋白、细胞色素 P450 和 3-磷酸甘油醛脱氢酶等，并推测这些基因在大豆与胞囊线虫的非亲 和互作过程中起重要作用。 关键词：大豆胞囊线虫；大豆； 抑制消减杂交；表达序列标签 Construction of SSH-cDNA Libraries and EST Analysis in Roots of Xiaoli Black Bean in Response to Heterodera glycines Parasitization 1,2 1 1 1 1 1 WANG Fang ，DUAN Yu-xi , CHEN Li-jie , WANG Yuan-yuan , ZHU Xiao-feng , WANG Dong 1 2 ( College of Plant Protection, Shenyang Agricultural University, Shenyang 110866; Qiqihaer Institute, Heilongjiang Academy of Agricultural Sciences, Qiqihaer 161006, Heilongjiang) Abstract ：【Objective 】The objective of this study is to research into the early stage root gene expression profile of G. max induced by H. glycines