保卫细胞微管骨架参与蛋白丝氨酸_苏氨酸磷酸化调节的气孔运动.pdfVIP

中国农业科学 2012,45(21):4351-4360 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2012.21.003 保卫细胞微管骨架参与蛋白丝氨酸/苏氨酸磷酸化 调节的气孔运动 叶 子，黄聪聪，于 荣 （首都师范大学生命科学学院，北京100048） 摘要：【目的】探讨在气孔运动的信息传递通路中，保卫细胞微管骨架与蛋白丝氨酸/苏氨酸磷酸化两种因素 之间是否存在相互作用，进而深入了解气孔运动机理。【方法】以拟南芥野生型及 GFP-α-tubulin-6 植株为材 料，利用药理学试验、激光共聚焦扫描显微镜观察、免疫印迹等细胞学及生物化学方法研究丝氨酸/苏氨酸蛋白 磷酸化对保卫细胞气孔运动及微管骨架的影响。【结果】丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶抑制剂星型孢菌素 （staurosporine，STS）能促进光照下气孔开放，微管特异性抑制剂长春花碱（vinblastine）和微管稳定剂紫 杉醇（taxol）分别减弱和增强其作用；1/2A 型磷酸酶抑制剂冈田酸（okadaic acid，OA）、花萼海绵诱癌素 A （calyculin A，CalA）抑制光照诱导的气孔开放，微管特异性药物长春花碱和紫杉醇又能分别增强和削弱该抑 制作用。激光共聚焦扫描显微镜下观察，两种磷酸酶抑制剂 OA 和 CalA 处理后，正常开放气孔保卫细胞中整齐 有序的辐射状微管数量显著减少，变为以交错网状及解聚态为主；蛋白激酶抑制剂 STS 处理则增加了辐射状微 管的比例。微管特异性药物紫杉醇、长春花碱分别与以上 3 种抑制剂共同处理，同样能够在一定程度上改变其 对保卫细胞微管骨架组织排布的影响。提取保卫细胞原生质体总蛋白进行免疫印迹检测，55 kD 分子量处的微 管蛋白发生明显的蛋白丝氨酸磷酸化。【结论】蛋白丝氨酸/苏氨酸磷酸化可以通过调节保卫细胞微管骨架的动 态排布进行气孔运动的信息传递。 关键词：微管骨架；丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸化；气孔运动 Microtubules in Guard Cells Involve in Serine/Threonine Phosphorylation During Stomatal Movement YE Zi, HUANG Cong-cong, YU Rong (College of Life Sciences, Capital Normal University, Beijing 100048) Abstract: 【Objective 】 The interaction between microtubules (MTs) and protein serine/threonine phosphorylation in guard cells was investigated in order to provide a reliable evidence for better understanding of the mechanism of stomatal movment. 【Method 】Pharmacological analysis, confocal laser scanning microscopy, and western blotting were used to explore the possible interaction of these two elements. 【Result 】 In vivo stomatal aperture assays revealed that staurosporine (STS), one well-known specific inhibi