不同冻存保护剂对绵羊前体脂肪细胞冻存效果的影响.pdfVIP

中国农业科学 2012,45(7): 1439-1446 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2012.07.024 不同冻存保护剂对绵羊前体脂肪细胞冻存效果的影响 1,2 3 3 3 3 4 1 1 2 蔡 勇 , 阿依木古丽 , 臧荣鑫 , 刘翊中 , 杨具田 , 乔自林 , 曹 忻 , 徐红伟 , 吴建平 1 2 3 （西北民族大学实验中心，兰州 730030 ； 甘肃农业大学动物科学技术学院/ 国家绒毛用羊产业体系环境控制实验室，兰州 730070； 西北民族大 ４ 学生命科学与工程学院，兰州 730030 ； 甘肃省动物细胞工程技术研究中心，兰州 730030 ） 摘要：【目的】探讨绵羊前体脂肪细胞冷冻保存的最佳冻存保护剂种类和浓度。【方法】在含20%胎牛血清的 DMEM/F12 培养液中分别添加不同浓度的DMSO、EG、PG、G 和PVP 作为冻存液，对原代培养的绵羊前体脂肪细胞进 行冷冻保存后，检测复苏细胞存活率、细胞增殖能力、细胞中脂肪沉积量，测量 GPDH 活性，并用实时荧光定量 PCR 检测PPAR γ和LPL mRNA 的表达水平，最后对复苏细胞进行染色体核型分析。【结果】各种冻存保护液中，10% DMSO 和 5% DMSO+5% PVP 组细胞存活率最高，与对照组相比差异不显著（P＞0.05），其它各试验组复苏细胞存活 率均显著低于对照组（P＜0.05）；各试验组中10% DMSO 组细胞增殖能力最强，且与对照组相比差异不显著（P＞ 0.05）；细胞复苏后培养6 d，各试验组脂肪沉积量与对照组之间没有显著差异（P＞0.05），而第11 天时，10 % DMSO 组脂肪沉积量显著高于其它试验组（P＜0.05），且与对照组相比差异不显著（P＞0.05）；各试验组 GPDH 活性和 LPL、PPAR γmRNA 的表达量与对照组之间没有显著差异（P＞0.05）；染色体核型分析发现，复苏细胞二倍体细胞 占主体，与原代细胞没有显著差异（P＞0.05）。【结论】含20% FBS 的DMEM/F12 培养液中添加10% DMSO 或10%PVP、 5% DMSO+5% PVP 均能有效保存绵羊前体脂肪细胞，但以10% DMSO 最佳。 关键词：冷冻保存; 前体脂肪细胞; 绵羊; 冷冻保护剂 Effects of Different Cryoprotectants on Ovine Preadipocytes Cryopreservation 1,2 3 3 3 3 4 1 CAI Yong , Ayimuguli , ZANG Rong-xin , LIU Yi-zhong , YANG Ju-tian , QIAO Zi-lin , CAO Xin , 1 2 XU Hong-wei , WU Jian-ping 1