赤霉毒素脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)酶联免疫检测方法研究.pdfVIP

中国农业科学 2007,40(4):721-726 Scientia Agricultura Sinica 赤霉毒素脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)酶联免疫检测方法研究 李 华，祭 芳，徐剑宏，王裕中，史建荣 （江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所，南京 210014 ） 摘要：【目的】建立快速、灵敏、有效的毒素检测方法，以保证麦类作物的安全生产以及谷物食品的安全性。 【方法】以主要赤霉病菌毒素脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)为对象，利用半琥珀酰化脱氧雪腐镰刀菌烯醇的牛血清蛋 白偶联物（3-HS-DON-BSA）作免疫原，分别采用腹膜腔注射法和颈、背部多点注射法免疫Balb/c小鼠和豚鼠，获 得 DON 的多抗血清，建立间接 ELISA 检测方法。【结果】多抗豚鼠血清的效价达到 1∶6 400，而小鼠混合血清的 效价则为 1∶12 800。引起 DON 抗体最大结合 50%抑制时，所需 DON 及其类似物 3-Ac-DON 和 T-2 毒素的量分别为 63μg·ml-1 -1 -1 、114μg·ml 和＞1 000μg·ml ；相对交叉反应率分别为 100%，55.2%和 6.3%。包被抗原的最适工作浓度 为1/1 500，小鼠血清工作浓度为1/1 600。在包被原和小鼠血清的最适工作浓度下，20%以上的甲醇稀释度对DON 免疫分析有显著的影响，低于 10%浓度的甲醇对 DON 免疫分析基本无影响。建立的间接竞争 ELISA 法检测范围为 0.01～100μg·ml-1 -1 ，检出限为 0.02μg·ml ，平均回收率为 82%～93%，精密度(CV%)为 4.65%～21.3%。【结论】本 文提出的毒素检测方法，检测成本低,方便易行,不仅可以应用于小麦赤霉病的病理学研究，也可广泛应用于谷物 及其制成品中DON毒素的含量检测，具有较好的应用价值。 关键词：脱氧雪腐镰刀菌烯醇；免疫学检测；ELISA；小麦赤霉病 Enzyme-Linked Immunosorbent-Assay for Deoxynivalenol (DON) LI Hua, JI Fang, XU Jian-hong, WANG Yu-zhong, SHI Jian-rong (Institute of Food Safety, Jiangsu Academy of Agricultural Sciences, Nanjing 210014) Abstract: 【Objective 】To detect Fusarium toxin Deoxynivalenol (DON), a trichothecene mycotoxin occurring in FHB contaminated grain, an indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was developed. 【Method 】Conjugation of DON to carrier proteins was facilitated by conversion of DON to 3-O-hemisuccinyl-DON(3-HS-DON). 3-HS-DON-bovine serum albumin (3-HS-DON-BSA) and 3-HS-DON-ovalbumin (3-HS-DON-OVA) were allowed to produce DON-specific mice antisera. 3HS-DON-OVA was coated onto the microplate, followed by incubation with DON and anti-DON antibody. 【Result 】The indirect competitive ELISA revealed that the optimal concentra