虫酰肼对斜纹夜蛾幼虫多巴脱羧酶基因表达的影响.pdfVIP

中国农业科学 2014,47(8): 1512-1521 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2014.08.007 虫酰肼对斜纹夜蛾幼虫多巴脱羧酶基因表达的影响 张文慧，侯海霞，杨 琼，王淑会，毛旭连，刘永杰 （山东农业大学植物保护学院，山东泰安 271018 ） 摘要：【目的】克隆斜纹夜蛾（Spodoptera litura ）多巴脱羧酶（dopa decarboxylase，DDC ）基因cDNA 全 长，研究虫酰肼对表皮形成过程中多巴脱羧酶基因表达的影响。【方法】通过RT-PCR 和RACE 技术克隆得到斜纹夜 蛾多巴脱羧酶基因的cDNA 全长；通过生物信息学工具对斜纹夜蛾多巴脱羧酶基因的DNA 序列及其编码的蛋白质序 列进行分析；采用饲料浸毒法测定虫酰肼对斜纹夜蛾不同龄期幼虫的毒力；利用荧光实时定量PCR 检测用亚致死 剂量虫酰肼处理的斜纹夜蛾幼虫DDC 基因的表达水平。【结果】克隆了斜纹夜蛾多巴脱羧酶基因的 cDNA 全长，开 放阅读框为1 263 bp，编码420 个氨基酸，5′端非编码区长105 bp，3′端非编码区长79 bp。克隆得到的cDNA 全 长提交至GenBank，登录号为KF620492。多重序列比对及系统进化树显示斜纹夜蛾DDC 基因推导的氨基酸序列与 鳞翅目昆虫的DDC 序列具有很高的相似性。利用SWISS-MODEL 在线工具进行同源建模，成功预测斜纹夜蛾DDC 三 维结构，其与果蝇属（Drosophila ）的多巴脱羧酶空间结构具有很高的相似性，功能结构域具有良好的保守性。 -1 测定虫酰肼对斜纹夜蛾3、4、5 和6 龄幼虫的毒力，其LC 分别为 33.32、40.28、71.20 和71.97 mg·L 。DDC 转 50 -1 录表达结果显示，用虫酰肼分别处理 12—48 h，4 个亚致死剂量（7.50、16.24、28.34 和 45.63 mg·L ）诱导的 -1 DDC 表达水平均显著高于对照，随着处理时间的延长激活作用呈现出先上升后下降的趋势，其中16.24 mg·L 亚致 死剂量在24、36 和48 h 诱导表达水平最高，各处理 36 h表达水平最高。处理60 h，4 个亚致死剂量的表达水平 均显著低于对照。这一结果说明虫酰肼进入虫体后先启动基因表达，而后抑制表达，影响昆虫正常蜕皮。【结论】 克隆得到斜纹夜蛾多巴脱羧酶基因cDNA 全长，虫酰肼干扰昆虫幼虫蜕皮与其影响表皮形成过程中多巴脱羧酶基因 的表达有关。 关键词：斜纹夜蛾；虫酰肼；多巴脱羧酶；基因克隆；实时定量PCR Effects of Tebufenozide on mRNA Expression of Dopa Decarboxylase Gene in Larvae of Spodoptera litura Fabricius ZHANG Wen-hui, HOU Hai-xia, YANG Qiong, WANG Shu-hui, MAO Xu-lian, LIU Yong-jie (College of Plant