大豆水杨酸结合蛋白基因GmSABP2的克隆及功能分析.pdfVIP

中国农业科学 2015,48(18):3580-3588 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2015.18.002 大豆水杨酸结合蛋白基因 GmSABP2 的克隆及功能分析 贾亚军，王晓婷，许 娜，郭 娜，邢 邯 （南京农业大学大豆研究所/ 国家大豆改良中心/作物遗传与种质创新国家重点实验室，南京 210095 ） 摘要：【目的】对大豆（ Glycine max ）水杨酸结合蛋白基因GmSABP2 进行克隆与表达分析，并转化拟南芥进 行耐盐、耐干旱分析，进一步了解该基因耐盐、耐干旱的分子机制。【方法】以拟南芥SABP2 为探针，搜索大豆基 因组数据库，从中挑选出同源性最高的序列，将其命名为 GmSABP2。利用电子克隆技术，从大豆叶子中克隆得到 大豆水杨酸结合蛋白基因 GmSABP2。通过 DNAMAN 程序进行氨基酸的多序列比对，利用 NCBI 的 CD-search 进行氨 基酸的保守结构域分析，应用MEGA程序进行系统进化树分析。对大豆幼苗进行盐和干旱胁迫处理来分析其在胁迫 下的表型变化。通过 Real time-PCR 分析大豆幼苗在盐和干旱处理条件下 GmSABP2 的表达特性。利用 Gateway 技 术构建植物表达载体pEarleyGate103-GmSABP2，转入根癌农杆菌EHA105，利用蘸花法侵染拟南芥，经抗性筛选得 到转基因株系。对野生型植株和转基因植株进行盐和干旱胁迫处理，并统计在胁迫条件下两者的种子萌发率、主 根长和成熟植株的存活率。【结果】克隆得到GmSABP2 的cDNA序列，序列全长1 235 bp，其开放阅读框为786 bp， 编码261个氨基酸，分子量为29.15 kD，等电点为5.58。氨基酸序列比对发现大豆和毛白杨、可可以及烟草相似 度较高。利用 NCBI 的 CD-search 发现大豆 SABP2 序列中存在一个 Abhydrolase_6（pfam：12697）水解酶保守结 构域。大豆 SABP2 蛋白属于α/β水解酶超家族。应用 MEGA 程序构建多物种的系统发生树，发现大豆和毛白杨及 可可亲缘关系较近，而与拟南芥亲缘关系较远。对大豆幼苗胁迫后的表型分析发现，在盐和干旱条件下大豆幼苗 均受到明显的胁迫效应。Real time-PCR分析表明大豆幼苗叶子中的 GmSABP2 在盐和干旱处理条件下均上调表达。 拟南芥耐逆性分析发现，在正常培养条件下，野生型植株和转基因株系均能正常萌发、生长。在高盐（150 mmol·L-1 NaCl）处理条件下，野生型植株的种子萌发率为38%，12 d大小幼苗主根长为0.4 cm，成熟植株的存活率为49%； 转基因株系的种子萌发率为 67%，12 d 大小幼苗主根长为 1.1 cm，成熟植株的存活率为 78%。在模拟干旱（20% PEG6000）处理条件下，野生型植株的种子萌发率为 31%，12 d 大小幼苗主根长为 0.5 cm，成熟植株的存活率为 36%；转基因株系的种子萌发率为57%，12 d 大小幼苗主根长为1.0 cm，成熟植株的存活率为66%。【结论】 GmSABP2 在拟南芥植株对盐和干旱的抗性中有一定的作用。 关键词：大豆；GmSABP2；组织表达分析；转基因拟南芥；功能分析 Cloning and Function Analysis of Salicylic Acid Binding Protein Gene GmSABP2 from Soybean JIA Ya-jun, WANG Xiao-ting, XU Na, GUO Na, XING Han (Soybean Research Institute, Nanjing Agricultural University/Na