多花黑麦草DUS测定中SSR标记品种鉴定比较分析.pdfVIP

中国农业科学 2015,48(2):381-389 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2015.02.18 多花黑麦草DUS测定中SSR标记品种鉴定比较分析 1 1 1 2 2 1 黄 婷 ，马 啸 ，张新全 ，张新跃 ，张瑞珍 ，符开欣 1 2 （四川农业大学草业科学系，四川雅安 625014 ； 四川省草原工作总站，成都 610041 ） 摘要：【目的】多花黑麦草是具世界栽培意义的牧草，但因异花授粉特性，育种材料的频繁交流导致品种间 的遗传差异越来越小，传统农艺性状进行品种鉴定变得越来越困难。高效、快速有效地鉴定品种对实现育种目标 具有重要作用，可为辅助多花黑麦草品种DUS测试和品种鉴定、知识产权保护等提供科学依据。【方法】基于SSR 标记具有稳定性强、多态性高和共显性特点，对6个国审骨干多花黑麦草品种采用30株混合取样策略，每个品种 以不同单株构成的30株混合样本量进行3 次重复试验，以重复试验中至少出现2次的频率高的强带进行统计，从 165对多花黑麦草SSR引物中，筛选出20对引物用于多花黑麦草品种鉴定。并采用30 株单株样本扩增与30株混 合样本扩增相结合的方法，加之扩增结果的比对，进行品种的鉴定分析。【结果】利用13-07A、01-06D和15-08C 引物对 6 个多花黑麦草品种进行 30 株单株和 30 株混合取样对比性分析表明，混合株的某些条带相对于单株条带 更为明显，且条带数更多，但也易出现一些弥散带，单株扩增中出现频率在 40%及以上的条带则会在混合样本中 出现；3 组混合取样结果表明，20 对 SSR 引物共扩增出 143 条清晰可辨条带，其中多态性条带 127 条，多态性条 带的比率为 88.81%，每对引物扩增的条带数为 5—11，平均为 7.15 条，平均多态性条带为 6.35 条，平均多态性 信息含量（PIC）为 0.571，有的引物虽多态性信息含量较低，但稳定性好，3 组混合样本扩增结果几乎一致；6 个多花黑麦草品种的遗传相似系数范围为0.4755—0.7552，遗传相似系数最大的为邦德和阿德纳，遗传相似系数 最小的为长江 2 号和特高。在平均遗传相似系数为 0.615 时可以将 6 个多花黑麦草品种划分为三大类：第Ⅰ类包 括安格斯1号、邦德、阿德纳、达伯瑞；第Ⅱ类是长江2号；第Ⅲ类是特高。20对引物中有9对引物可以直接进 行6个品种的鉴定，而其余的引物只能鉴别其中的3个或4个，则可通过不同引物的组合提高鉴别能力。【结论】 对于异花授粉植物，多态性并非衡量引物有效性的唯一标准，引物稳定性也是衡量引物有效性的重要指标；相对 于单株取样法，采用混合取样法进行品种鉴定更为有效；筛选出的 20 对 SSR 引物可以明确区分供试材料，采用 SSR分子标记对多花黑麦草进行品种鉴定分析具有可行性。 关键词：多花黑麦草；品种鉴定；取样方法；SSR标记；DUS测定 Comparation of SSR Molecular Markers Analysis of Annual Ryegrass Varieties in DUS Testing 1 1 1 2 2 1 HUANG Ting , MA Xiao , ZHANG Xin-quan , ZHANG Xin-yue , ZHANG Rui-zhen , FU Kai-xin 1