复方苦芩对感染猪传染性胃肠炎病毒的PK-15细胞中Bcl-2_BAX mRNA转录的影响.pdfVIP

中国农业科学 2014,47(11):2242-2250 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2014.11.018 复方苦芩对感染猪传染性胃肠炎病毒的PK-15 细胞中 Bcl-2/BAX mRNA 转录的影响 邵秋红，凌榕镔，朱兆荣，刘 娟，郭志兴，王 鹏 （西南大学荣昌校区兽医科学研究中心中药创新研究室，重庆 402460 ） 摘要：【目的】探讨中药复方苦芩对感染猪传染性胃肠炎病毒 (transmissible gastroenteritis virus of swine, TGEV)的猪肾细胞（PK-15）中凋亡基因Bcl-2/BAX mRNA 转录的影响。【方法】体外扩增TGEV，用TGEV 感 染PK-15 细胞的模型进行体外试验研究，试验中设有复方苦芩组、空白组、模型组及黄芪多糖组，在测定了病毒 半数感染细胞量（TCID ），复方苦芩及黄芪多糖药液对PK-15 细胞的最大无毒浓度后，制作细胞爬片采用瑞士染 50 色法染色观察PK-15 细胞的形态变化;按试剂盒操作提取各试验组 RNA 并及时反转录为cDNA，采用实时荧光定量 PCR 法检测细胞中Bcl-2 和BAX mRNA 转录情况。【结果】与空白组相比，模型组的PK-15 细胞发生了明显的细胞 病变效应（cytopathic effect,CPE ）,细胞变细长，细胞间成网状，细胞核着色较浅，出现核浓缩、固缩、碎裂 等现象；与模型组比，复方苦芩组与黄芪多糖组细胞病变得到改善，而复方苦芩组效果更加明显，大部分细胞核 结构清晰，染色质着色均一，少部分细胞核变大或碎裂；与空白组相比，模型组Bcl-2 mRNA 转录量减少（P＜0.01 ）， 复方苦芩组Bcl-2 基因转录量增加，为模型组的 1.403 倍（P＜0.01 ）、黄芪多糖组的1.078 倍（P＞0.05）；与空 白组相比，模型组BAX mRNA 转录量明显升高，而其他3 组BAX 基因转录差异不明显（P＞0.05 ），模型组BAX 基因 转录量为空白组的1.440 倍、复方苦芩组1.290 倍、黄芪多糖组的 1.490 倍，差异极显著（P＜0.01），复方苦芩 组、黄芪多糖组BAX 基因转录量分别为空白组的 1.116 倍、0.966 倍，差异不显著（P＞0.05 ）；与空白组相比， 模型组Bcl-2/BAX mRNA 转录比值降低，差异极显著（P＜0.01）；与模型组相比，复方苦芩组、黄芪多糖组Bcl-2/BAX mRNA 转录比值均增加，分别为模型组1.809 倍和1.940 倍，差异极显著（P＜0.01 ），复方苦芩组Bcl-2/BAX mRNA 转录比值分别为空白组的0.749倍（P＜0.01 ）、黄芪多糖组的0.933 倍（P＞0.05 ）。【结论】复方苦芩可通过上调 PK-15 细胞Bcl-2 mRNA 转录，下调BAX mRNA 的转录，从而抑制TGEV 引起的PK-15 细胞凋亡。 关键词：复方苦芩；猪传染性胃肠炎病毒；PK-15； Bcl-2；BAX；荧光定量PCR Effect of Kuqin Compound on mRNA Transcription of Bcl-2/BAX in PK-15 Cells Infected by TGEV SHAO Qiu-hong, LING Rong-bin, ZHU Zhao-rong, LIU Juan, GUO Zhi-xing, WANG Peng (Traditional Chinese Medicine Innovation Laboratory, Veterinary Science Research Centre of Rongchang Campus, Southwest University, Chongqing 402460) Abstract: 【Obj