分泌抗春雷霉素单克隆杂交瘤细胞株的建立 及免疫学特性鉴定.pdfVIP

中国农业科学 2013,46(2):417-423 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2013.02.021 分泌抗春雷霉素单克隆杂交瘤细胞株的建立 及免疫学特性鉴定 1,2 1 1 1 1 1 2 1 龚 芳 ，职爱民 ，李青梅 ，胡骁飞 ，赵启发 ，张小辉 ，陆启玉 ，张改平 1 2 （河南省农业科学院/河南省动物免疫学重点实验室，郑州 450002 ； 河南工业大学粮油食品学院，郑州 47100 1） 摘要：【目的】制备高灵敏、高特异性的抗春雷霉素单克隆抗体，并对其免疫学特性进行鉴定。【方法】采用 EDC 法将KSM 分别偶联于载体蛋白BSA 和OVA 上，分别合成免疫原KSM-BSA 和包被原KSM-OVA，经SDS鉴定 后，免疫Balb/c 小鼠，免疫间隔4 周，4 次免疫后，利用间接ELISA 和间接竞争ELISA 测定其多抗血清效价和敏 感性，选出效价高、敏感性好的小鼠进行细胞融合，经过多次亚克隆筛选出分泌高敏感的特异性抗KSM 单克隆抗 体的杂交瘤细胞株，体内诱生腹水法制备抗KSM 的单克隆抗体并对其免疫学特性进行鉴定。【结果】SDS鉴 4 定结果显示KSM-BSA 成功偶联，间接ELISA 检测显示免疫的6 只小鼠血清效价均达1:10 以上，其中3 号小鼠多抗 -1 血清敏感性最好，半数抑制浓度IC 为73.9ng·mL ，融合后筛选出两株杂交瘤细胞株1G7 和2C8，亚型均为IgG1 50 3 3 5 5 型，其细胞上清效价分别为1:5.12×10 和1:1.28×10 ，腹水效价分别为1:5.12×10 和1:2.56×10 ，抗KSM 的 -1 单克隆抗体对春雷霉素的IC 为8.902ng·mL ，与其它竞争物的交叉率均小于0.03%。【结论】本试验成功合成了 50 春雷霉素人工抗原，并制备了敏感性高、特异性好的单克隆抗体，为春雷霉素免疫学快速检测方法的建立奠定了 基础。 关键词：春雷霉素；人工抗原；单克隆抗体 Establishment of Hybridoma Cell Lines Secreting Anti-Kasugamycin Monoclonal Antibody and Identification of Their Immunological Properties 1,2 1 1 1