二斑叶螨乙酰辅酶A羧化酶基因全长cDNA克隆及其生物信息学分析.pdfVIP

中国农业科学 2013,46(8):1736-1744 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2013.08.024 二斑叶螨乙酰辅酶A羧化酶基因全长cDNA克隆 及其生物信息学分析 1 2 1 1 吕娟娟 , 王进军 , 高新菊 , 沈慧敏 1 2 （甘肃农业大学草业学院/草业生态系统省部共建教育部重点实验室/ 中-美草地畜牧业可持续发展中心，兰州 730070 ； 西南大学植物保护学院昆虫 学及害虫控制工程重点实验室，重庆 400716 ） 摘要：【目的】克隆二斑叶螨（ Tetranychus urticae ）的乙酰辅酶A羧化酶（Acetyl-CoA carboxylase，ACCase） 基因，对其进行生物信息学分析并研究其在二斑叶螨敏感和抗性品系中的表达量。【方法】利用 RT-PCR 技术克隆 ACCase基因的 cDNA 全长，采用生物信息学软件分析克隆基因的编码蛋白特性；利用实时荧光定量 PCR 方法分析 ACCase 基因在二斑叶螨敏感和抗螺螨酯品系中的表达差异。【结果】ACCase 基因（GenBank 登录号：JX424763） 的开放阅读框长度为7 068 bp, 编码2 235 个氨基酸，分子量约为266.35 kD，理论等电点为6.38，包含典型的 生物素羧化酶（biotin carboxylase，BC）、生物素羧基载体蛋白（biotin carboxyl carrier protein，BCCP） 和羧基转移酶（carboxyltransferase，CT）3 个结构域。结合其它物种 ACCase 基因构建系统发育树表明，该基 因与体虱（Pediculus humanus corporis ）ACCase基因具有较高的同源性。实时荧光定量 PCR 结果表明，ACCase 基因在抗螺螨酯品系中的相对表达量较高，与明感品系间存在显著差异。【结论】利用 RT-PCR 技术在二斑叶螨中 克隆到 ACCase 基因，ACCase 基因的过量表达可能与二斑叶螨对螺螨酯的抗性形成有关，为二斑叶螨的抗性治理 提供了依据。 关键词：二斑叶螨; 螺螨酯; ACCase；cDNA 克隆；real-time PCR Cloning and Bioinformatics Analysis of Acetyl-CoA Carboxylase Gene cDNA in Tetranychus urticae 1 2 1 1 LÜ Juan-juan , WANG Jin-jun , GAO Xin-ju , SHEN Hui-min 1 ( College of Prataculture, Gansu Agricultural University/Key Laboratory of Grassland Ecosystem Education Ministy/The Sino-U.S. Centers for Grazingland Ecosystem Sustainability, Lanzhou 730070; 2Key