短枝型苹果MdRGL基因的克隆及原核表达分析.pdfVIP

中国农业科学 2012,45(7): 1347-1354 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2012.07.012 短枝型苹果MdRGL 基因的克隆及原核表达分析 宋 杨，张艳敏，刘美艳，王传增，刘 金，冯守千，王延玲，陈学森 （山东农业大学园艺科学与工程学院/作物生物学国家重点实验室，山东泰安 271018 ） 摘要：【目的】克隆短枝型苹果（Malus domestica Borkh.）的 MdRGL 基因，并对其进行生物信息学分析， 构建该基因的原核表达载体，在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白，为明确短枝型苹果MdRGL 基因与短枝芽变特性之 间的关系奠定基础。【方法】采用同源克隆法，以短枝型苹果叶片总RNA 为模板，通过RT-PCR 获得短枝型苹果MdRGL 的cDNA 片段，T/A 克隆后进行序列测定。将克隆到的短枝型苹果MdRGL 克隆到表达载体pGEX-4T-1 上，构建融合 表达载体pGEX-4T-MdRGL，转化到大肠杆菌BL21 （DE3）并诱导表达。【结果】从短枝型苹果中克隆到5 条MdRGL 基因：MdRGL1a/b、MdRGL2a/b 和MdRGL3b。序列分析表明，除MdRGL3b 外，另外4 条序列都具有DELLA 和VHYNP 结构域。利用所构建的原核表达载体，经IPTG 诱导和SDS电泳检测结果表明，表达蛋白与预期蛋白大小一 致。【结论】短枝型苹果中DELLA 蛋白的克隆和原核表达的成功，为进一步纯化和鉴定目的蛋白及研究其功能奠定 了试验基础。 关键词：短枝型苹果；DELLA 蛋白；基因克隆；序列分析；原核表达 Cloning and Prokaryotic Expression of MdRGL Gene from Spur-Type Apple (Malus domestica Borkh.) SONG Yang, ZHANG Yan-min, LIU Mei-yan, WANG Chuan-zeng, LIU Jin, FENG Shou-qian, WANG Yan-ling, CHEN Xue-sen (College of Horticulture Science and Engineering, Shandong Agricultural University/State Key Laboratory of Crop Biology, Taian 271018, Shandong) Abstract: 【Objective 】Cloning, sequence analysis of the DELLA genes from Malus domestica Borkh and its expression it in E. coli were conducted to further explore the relationship between DELLA and mutation shoot of spur type bud sport apple. 【Method 】 The MdRGL cDNA fragments amplified from Malus domestica Borkh by reverse transcription PCR (RT-PCR) and then the cloned genes of MdRGL were inserted into vector pGEX-4T-1. The recombinant plasmids pGEX-4T-MdRGL were expressed in a prokaryotic expression system after its transformation into E. coli BL21 (DE3). 【Result 】 Five DELLA genes, MdRGL1a/b , MdRGL2a/b and MdRGL3b were