尖孢镰刀菌FoPLC4参与调控孢子形成和致病性.pdfVIP

中国农业科学 20 14,47(12):2357-2364 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2014.12.008 尖孢镰刀菌FoPLC4 参与调控孢子形成和致病性 孙 玲，褚小静，郝 宇，张洪滨，梁元存 （山东农业大学植物保护学院，山东泰安 271018 ） 摘要：【目的】黄瓜枯萎病是黄瓜生产中的重要病害，其病原菌为尖孢镰刀菌黄瓜专化型（Fusarium oxysporum f. sp. cucumerinum ）。研究旨在明确尖孢镰刀菌黄瓜专化型编码磷脂酶C （phospholipase C，PLC ）的FoPLC4 在调控分生孢子形成和致病性等方面的功能。【方法】采用生物信息学方法，确定FoPLC4 在染色体上的位置，分 析 FoPLC4 结构。基于尖孢镰刀菌番茄专化型基因组数据库，采用特异性引物克隆黄瓜枯萎病菌 FoPLC4。根据同 源重组原理构建携带潮霉素磷酸转移酶（hygromycin phosphotransferase，HPH ）基因的敲除载体，利用PEG （polyethylene glycol ）介导的方法转化原生质体，获得黄瓜枯萎病菌的敲除突变体∆FoPLC4 和遗传回复突变体 ∆FoPLC4/plc4。转化子经潮霉素B 平板筛选后通过PCR 和RT-PCR 分子验证。在PDA （potato dextrose agar ）培 养基上测定∆FoPLC4 生物学性状。利用分生孢子接种黄瓜胚根测定∆FoPLC4 在黄瓜幼苗上的致病性。【结果】FoPLC4 位于尖孢镰刀菌基因组的4 号染色体，DNA 全长 3 282 bp，不含内含子，编码1 093 个氨基酸；FoPLC4 含有5 个 结构域，包括EF 手形（EF-hand ）区、PH （pleckstrin homology ）区、C2 区和2 个催化区，属于PLC δ亚型。与 野生型菌株相比，∆FoPLC4 菌落生长速率没有显著改变，但气生菌丝较疏松；∆FoPLC4 可以同时产生大型分生孢 子和小型分生孢子，大型分生孢子只占孢子总数的 12.1%，而野生型菌株在相同条件下只能产生小型分生孢子， ∆FoPLC4 产孢量下降了 82.2%。致病性测定表明∆FoPLC4 在黄瓜幼苗上的萎蔫症状明显减轻，接种 10 d 后病情指 数下降了53.3%。回复突变体∆FoPLC4/plc4 在菌落生长、产孢和致病性等性状与野生型相比没有显著差别。【结论】 尖孢镰刀菌黄瓜专化型FoPLC4 全长 3 282 bp，不含内含子，编码1 093 个氨基酸。与野生型相比，∆FoPLC4 分生 孢子的产孢类型明显改变、产孢数量和对黄瓜幼苗的致病性显著降低。FoPLC4 在调控尖孢镰刀菌分生孢子形成和 致病性中发挥重要作用。 关键词：尖孢镰刀菌；FoPLC4；孢子形成；致病性 FoPLC4, Encoding Phospholipase C4, Is Involved in Sporulation and Pathogenicity in Fusarium oxysporum SUN Ling, CHU Xiao-jing, HAO Yu, ZHANG Hong-bin, LIANG Yuan-cun (College of Plant Protection, Shandong Agricultural University, Taian 271018, Shandong) Abstract : 【Objective 】Cucumber Fusarium wilt, caused by Fusarium oxysporum f. sp. cucumerinum, is an important disease in cucumber (Cucumis sativus L.) and can result in serious economic loss. The objective of this study is to invest