卷羽鸡毛囊发育规律及卷羽候选基因KRT75遗传特征分析.pdfVIP

中国农业科学 2015,48(4):821-830 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2015.04.20 卷羽鸡毛囊发育规律及卷羽候选基因 KRT75 遗传特征分析 陶 林，杜炳旺，张 丽 （广东海洋大学农学院动物科学系/广东海洋大学家禽育种中心，广东湛江 524008 ） 摘要：【目的】研究卷羽鸡卷羽弯曲过程、结构特点、卷羽毛囊发育规律和卷羽候选基因KRT75 序列特征及其 在卷羽毛囊发育过程中的表达规律。【方法】通过对360只卷羽鸡从1日龄到300日龄卷羽发生情况进行观察，了解 其羽毛出壳后弯卷过程；制作成年卷羽和片羽羽毛切片，了解卷羽羽轴、羽枝、羽小枝、羽小钩显微结构特点；对 卷羽鸡和片羽鸡胚胎期 8—19 d 皮肤毛囊制作石蜡切片，阐明卷羽毛囊发生过程，分析卷羽和片羽毛囊发育异同； 分别提取13胚龄卷羽和片羽鸡皮肤RNA，反转录为cDNA，连接pMD™ 18-T 载体，将连接产物加入DH5α感受态细胞 中，转化涂板，挑取白色菌落摇菌后PCR 鉴定，阳性菌液送测序，同时随机抽取15 只300 日龄片羽鸡和 15 只卷羽 鸡，翅下静脉采血,血液基因组柱式小量提取试剂盒提取DNA,PCR产物纯化后测序，采用DNAMAN软件比对分析KRT75 基因的遗传特征；分别提取卷羽和片羽胚胎期 E 8—E 17d 皮肤 RNA，反转录成 cDNA，根据 SYBR 试剂盒操作说明荧 光定量KRT75基因在卷羽和片羽整个毛囊发育过程中的表达变化规律。【结果】卷羽鸡初生绒羽弯曲明显，以后逐渐 弯曲，在第一次换羽结束时（约 6 周龄左右）全身羽毛显著弯曲；卷羽羽轴向外翻卷，羽小枝上着生羽钩，但羽小 枝之间不能相互勾连形成闭合羽片；卷羽毛囊发育从胚胎期第8天开始到第16天结束，整个过程类似于片羽毛囊发 育，卷羽毛囊在胚胎期第8—16天完成，整个过程和片羽毛囊发育过程基本相似，但在12—15胚龄卷羽毛囊髓质面 积、羽小枝大小与片羽毛囊存在明显差异，其中在第12—14天，卷羽毛囊髓质面积要明显大于片羽，羽小枝板要明 显小于片羽；卷羽鸡和片羽鸡KRT75基因CDS全长均为1 569bp，编码522个氨基酸，全序列没有发生69 bp的缺失 突变，但在CDS区的3个SNP（954bp: TC；967bp: TC；978bp: CT）可能是卷羽、片羽区别的分子标记；KRT75 基因在片羽和卷羽中的表达变化存在明显差异，在片羽毛囊胚胎期 E8-E17 中表达量均很低，而在卷羽鸡 12 胚龄显 著上调，且高表达量持续到15胚龄，16胚龄显著下调，其中在胚胎期第9、10、12-16天KRT75基因在卷羽中的表 达量均极显著高于片羽（P0.01），KRT75基因可能在卷羽羽轴髓质和羽小枝分化过程中起重要作用。【结论】初步研 究表明卷羽鸡的卷羽并不是由于KRT75基因缺失突变引起，但KRT75 可能与卷羽髓质和羽枝嵴形成有关。 关键词：卷羽鸡；毛囊发育；KRT75；SNP；表达 The Development of Frizzled Follicle and Genetic Characteristics of Candidate Gene KRT75 in Frizzled Feather Chicken TAO Lin, DU Bing-wang, ZHANG Li (Department of Animal Science, Agricultural College of Guangdong Ocean University/Poultry Breeding Center of Guangdong Ocean University, Zhanjiang 524088, Guangdong) Abstract: 【Objective 】The Objective of this study is to