蓝光促进绿僵菌产孢和产孢调节基因fluG表达.pdfVIP

中国农业科学 2014,47(22):4426-4435 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2014.22.008 蓝光促进绿僵菌产孢和产孢调节基因 fluG 表达 王苗苗，农向群，刘少芳，樊蓉蓉，曹广春，王广君，张泽华 （中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室，北京100193） 摘要：【目的】明确蓝光照射对绿僵菌产孢的促进作用及与产孢调节基因fluG 表达量的关系，为绿僵菌发酵 生产提供光照促进产孢的理论依据和技术参数。【方法】以绿僵菌高效杀虫菌株M202 为试材，平板接种培养，通 过显微观察每隔12 h的菌体发育状态，确定菌株发育进程产孢前期、初始期、旺盛期、平稳期的对应时段。以蓝 光6 804—54 432 J·m-2 的8个能量梯度，照射处理在黑暗中培养至不同发育期即24、48、72 h的菌体，继续培养 到产孢稳定期后，采用打孔法取样，以显微计数法检测计算产孢量，评估菌体发育阶段对蓝光的敏感性以及蓝光 照射能量对产孢量的影响。克隆 -2 fluG，建立 fluG real-time PCR 反应体系；以蓝光 6 804—54 432 J·m 的 8 个 能量梯度，照射处理发育至48 h即处于产孢前将进入产孢期的菌丝体，照射处理后立即取菌丝，液氮冷冻，提取 RNA并反转录成cDNA，通过 real-time PCR检测 fluG 表达量，评估蓝光照射对 fluG 表达量的影响。【结果】绿僵 菌 M202 菌株发育 24 h 前为萌发期，24—72 h 为菌丝快速生长期，其中 48 h 还处于产孢前期，60 h 已进入产孢 初期，72—96 h为产孢盛期，96—120 h为产孢末期，120 h 后为孢子成熟期，7—10 d后产量达到稳定。蓝光不 同能量照射 24 h 菌龄即初期菌丝体，其产孢量与无光照处理的对照无显著差异，照射 48 h 菌龄即菌丝快速生长 的产孢前期，其产孢量显著提高，最适照射能量为 20 412—40 824 J·m-2 -2 ，其中 34 020 J·m 使产孢量最高达无光 照处理对照的 1.50 倍，72 h 菌龄即产孢结构形成、产孢量快速增长期对蓝光最为敏感，低至 6 804 J·m-2 的照射 能量即可显著提高产孢量，且宽泛的各剂量均有效。对于 fluG 的表达，在试验照射剂量范围内，48 h 菌龄接受 蓝光照射后， -2 fluG 表达量显著提高，表达量随照射剂量呈先上升后下降的趋势，在20 412 J·m 以下较低能量时， fluG 表达量与照射剂量成正相关，当照射时间为2.25 h 时，表达量达到最高，为无光照处理对照的2.41倍，而 在20 412 J·m-2 以上较高能量时，二者呈现负相关，随着蓝光照射时间的增加，基因表达量呈下降趋势；灰色关联 度分析显示，当关联因子为0.5时，产孢量与 fluG 表达量的关联度 r 值为0.74。【结论】蓝光照射能够促进绿僵 菌产孢及 -2 fluG 表达，不同发育阶段的菌体对蓝光感应有显著差异，在48—72 h菌龄时照射34 020 J·m 能量可获 得最高产孢量，产孢与 fluG 之间有较高关联度说明 fluG 参与绿僵菌产孢的调控。 关键词：绿僵菌；蓝光照射；产孢；fluG；基因表达 Blu-Rays Promote Conidiation of Met