藜CaMAPKK2的表达分析及盐胁迫信号通路互作组分的筛选.pdfVIP

中国农业科学 2013,46(5):889-897 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2013.05.003 藜CaMAPKK2 的表达分析及盐胁迫信号通路互作组分的筛选 陈莎莎，贺转转，姜生秀，李晓荣，邢佳佳，吕秀云，兰海燕 （新疆大学生命科学与技术学院/新疆生物资源基因工程重点实验室，乌鲁木齐 830046 ） 摘要：【目的】通过对抗逆植物藜的丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）级联途径中 MAPKK 的胁迫表达模式分析及 信号转导途径互作组分的筛选，探索植物藜响应外界胁迫信号诱发逆境耐受的机制。【方法】以藜叶片总RNA 为模 板，利用定量PCR 方法对NaCl、H O 和ABA 胁迫下藜MAPKK 表达规律进行了分析。利用RT-PCR 结合RACE 技术获 2 2 得了藜MAPKK 的全长cDNA 序列。利用酵母双杂交技术对MAPKK 盐胁迫信号通路互作组分进行了分析。【结果】获 得一个藜MAPKK 的全长cDNA 序列，命名为CaMAPKK2，其开放阅读框为1 089 bp，编码一个由362 个氨基酸组成 的丝裂原活化蛋白激酶。定量PCR 显示CaMAPKK2 受盐胁迫诱导明显上调表达，同时受外源H O 和ABA 调控。H O 2 2 2 2 -1 合成抑制剂DPI 与ABA 合成抑制剂Na WO 显著抑制了300 mmol·L NaCl 处理下CaMAPKK2 的表达。以全长CaMAPKK2 2 4 为诱饵蛋白，利用酵母双杂交技术筛选到5 个可能与CaMAPKK2 相互作用的蛋白。测序结果显示，其中1 个序列可 通读，该cDNA 序列长794 bp，与欧洲赤杨（Alnus glutinosa）和拟南芥的噻唑合成酶（thiazole biosynthetic enzyme）基因AgTHI1 和AtTHI1 核酸序列相似度达79%和78%，其它4 个序列没有连续的读码框。【结论】CaMAPKK2 受NaCl 和H O 诱导上调表达，暗示盐胁迫可能通过诱导H O 和ABA 的积累从而导致CaMAPKK2 表达增加。要进一 2 2 2 2 步筛选CaMAPKK2 互作组分需获得更多阳性克隆并开展相关功能验证试验。 关键词：藜；盐胁迫；信号转导途径；MAPKK；酵母双杂交；定量PCR The Expression Analysis and Screening of Interaction Protein of Mitogen-Activated Protein Kinase (CaMAPKK2) in Salt-Stress Signal Pathways of Chenopodium album CHEN Sha-sha, HE Zhuan-zhuan, JIANG Sheng-xiu, LI Xiao-rong, XING Jia-jia, LÜ Xiu-yun, LAN Hai-yan (College of Life Science and Technology, Xinjiang University/Xinjiang Key Laboratory of Biological Resources and Genetic