生物工程制药之维生素生产工艺摘要.pptVIP

维生素生产工艺 维生素生产工艺 维生素生产工艺 2.7.6 维生素B2的代谢调控和通量分析 细胞代谢途径的实质就是与一组特定的流入和流出代谢物相联系的任何一个合理、可观察的生化反应序列，代谢工程利用重组 DNA 技术对细胞的酶反应、物质运输以及调控功能进行遗传操作，进而改良细胞的生物活性，它关注代谢途径的组合而非单一的反应，用整体、系统的观点考察完整的生化反应网络，重视途径和目标产物的热力学可行性、代谢通量及其控制。将代谢通量的定量分析方法与代谢通量控制的分子生物学技术完美结合在一起，合理地修饰生物细胞的遗传性状，是代谢工程的基石。系统研究代谢通量及其控制机制有三大基本步骤： （1）尽可能多地观察途径并测定其流量； （2）在代谢网络中施加一个已知的扰动，并确定系统达到新的稳态时的代谢通量； （3）系统分析代谢通量扰动的结果。若某个代谢通量的扰动对其下游代谢通量未能造成可观察的影响，那么就可以认为该处的节点对上游扰动的反应是刚性的，反之则为柔性。在刚性节点处，试图通过改变上游酶活性来影响下游代谢通量的做法是徒劳的。 维生素生产工艺 细胞内同时进行的数千个生化反应构成了错综复杂的细胞代谢网络体系，其中的各反应速率决定了整个网络的代谢通量，而这些反应的速率受相应的酶活水平以及参与反应的代谢物浓度的影响，它们同时又受细胞性状和所处环境的制约。代谢控制分析理论认为，代谢通量的控制是由组成代谢途径的各个步骤及相互之间的关系决定的，并且分布在整个代谢途径上。 生物大分子和效应物并不能直接产生控制，而是通过作用于所在的反应而影响整个代谢系统的控制，限速步骤不是固定的，但系统控制系数的总和却是固定的，它可以定量描述各个步骤对整个代谢控制发挥作用的相对程度，从而使实验结果的解释更趋合理。 维生素生产工艺 代谢通量平衡一般包括三个部分： 化学计量网络分析 代谢通量分析 同位素标记物分析 维生素生产工艺 维生素生产工艺 维生素生产工艺 维生素生产工艺 维生素生产工艺 维生素生产工艺 维生素生产工艺 维生素生产工艺 由定量描述确定的代谢网络可知，三种菌株中糖酵解途径的通量 r7均大于戊糖磷酸氧化途径（pentose phosphate pathway, PPP）的通量r4，因此糖酵解是葡萄糖代谢的主要途径，大约有45~50%的葡萄糖用于生物体的合成，2.5-8.5%的葡萄糖用于合成核黄素，在发酵过程中大约有0.5~2%的葡萄糖用于合成副产物乙酸，3~7%的葡萄糖通过丙酮酸合成其它有机物，在我们的分析测定中，这些有机物中主要为双乙酰，其含量约占30~70%，副产物中几乎检测不到甲酸。 维生素生产工艺 一般认为PP 途径的两个重要功能是提供还原力 NADPH 及前体物 Ribulose-5-P 和 4-磷酸赤藓糖，24R7/pMX45 中 PPP的通量比较小，通量r6只有 3.2%，前体物Ribulose-5-P 几乎全用于合成核酸和核黄素，而在 RH13[pRB63]40 中虽然 PPP的通量增加了10%，但其合成核黄素的通量却基本和 24R7/pMX45 相同。 另外在 RH33/pMX45 中 PPP的通量达到 32%，这比其两株分别高约 20%和10%，但其合成核黄素的通量仅增加了2~2.5%，通量分析的结果表明 Ribulose-5-P的供给已经远大于合成核黄素的需要，仅仅通过增加 r4很难使合成核黄素的通量增加，因此要进一步提高 RH33/pMX45 中核黄素合成的通量必须增加从Ribulose-5-P 到核黄素的合成能力，其中主要包括提高 GTP 的合成通量和从 GTP到核黄素的通量两个环节。 维生素生产工艺 将 RH33/pMX45 染色体上的 pRB63 进一步进行扩增以增加核黄素操纵子的剂量，然后将扩增后的菌株进行摇瓶发酵，结果扩增后菌株的核黄素产量并没有得到有效的提高。这表明 RH33/pMX45 中核黄素合成的主要通量限制因素可能存在于从 Ribulose-5-P 到 GTP 的一系列反应中。 维生素生产工艺 2.7.7 维生素B2的提取工艺 VB2提取工艺路线（一） （1）?用盐酸调发酵液pH到7，然后加热到70℃，维持45分钟； （2）将发酵液打入一个中间储罐，然后静置，冷却到20℃，然后将发酵液进行多次离心，第一次需要的离心条件是：离心力2500g—3000g，最好是根据情况进行调整，以后的离心条件都是600g—750g，根据实际情况进行调整。 （3）离心后的固体加入到酸性的去离子水中，同时将悬浮液加热到120℃，搅拌并维持60分钟，然后冷却到80℃。离心过滤，得到的固体纯度可以达到96%。 （4）?如果此时的vb2做成饲料或添加剂，