桃果实磷脂酶Dα基因的电子克隆及序列分析.pdfVIP

中国农业科学 2009,42(5):1705-1712 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2009.05.025 桃果实磷脂酶Dα基因的电子克隆及序列分析 1 1 2 3 1 万嗣宝 ，张 斌 ，战吉宬 ，陈建业 ，尹京苑 1 2 （上海大学生命科学学院，上海 200444 ； 中国农业大学食品科学与营养工程学院，北京 100083； 3 华南农业大学园艺学院/广东省果蔬保鲜重点实验室，广州 510642 ） 摘要： 【目的】克隆桃果实中的磷脂酶 Dα基因，并对其进行序列分析和低温表达模式分析。【方法】采用 电子克隆与RT-PCR相结合的方法分离桃果实PLDα 基因cDNA全长序列；半定量RT-PCR和 Northern杂交检测目 的基因在桃果实低温贮藏过程中的表达情况。【结果】成功获得全长为2 859 bp的桃果实PLDα基因序列，该序 列具有完整的开放阅读框架（ORF，172～2 604 bp），编码810个氨基酸。对ORF进行的RT-PCR验证结果与电子 克隆序列一致。序列分析显示，桃果实 PLDα基因编码的氨基酸序列与草莓、番茄、葡萄等物种的磷脂酶Dα氨基 酸序列之间具有高度的保守性，含有N端C2 结构域及两个保守的活性中心。半定量RT-PCR和Northern杂交分析 显示，桃PLDα基因在低温贮藏过程中被诱导表达。【结论】本研究首次通过电子克隆的方法获得了桃果实 PLDα基 因的全长序列，揭示了其序列特征，并初步明确了其在桃低温贮藏期间的表达模式。结果证明基于 EST 数据库的 电子克隆已经是获取植物新基因的有效途径，同时为更深入研究桃果实的耐冷性及低温贮藏方法奠定了基础。 关键词：桃；磷脂酶Dα；电子克隆；RT-PCR；Northern杂交 In Silico Cloning and Sequence Analysis of Phospholipase Dα Gene from Peach Fruit 1 1 2 3 1 WAN Si-bao , ZHANG Bin , ZHAN Ji-cheng , CHEN Jian-ye , YIN Jing-yuan 1 2 ( School of Life Sciences, Shanghai University, Shanghai 200444; College of Food Science and Nutritional Engineering, China Agricultural University, Beijing 100083 ; 3Guangdong Key Laboratory for Postharvest Science/College of Horticulture, South China Agricultural University, Guangzhou 510642) Abstract: 【Objective 】 The aim of this study was to isolate and clone new gene coding for phospholipase Dα from Prunus pers