小麦叶锈菌与TcLr19非亲和互作cDNA文库的EST分析.pdfVIP

中国农业科学 2010,43(24):5037-5045 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2010.24.007 小麦叶锈菌与TcLr19非亲和互作cDNA文库的EST分析 1，2 1，3 1 1 1 陈玉婷 ，陈云芳 ，李淑凤 ，杨文香 ，刘大群 1 （河北农业大学植物病理系/河北省农作物病虫害生物防治工程技术研究中心/ 国家北方山区农业工程技术研究中心，河北保定 071001 ； 2 3 上海出入境检验检疫局，上海 201200 ； 苏州出入境检验检疫局，江苏苏州 215126 ） 摘要：【目的】建立小麦叶锈菌与小麦非亲和互作的基因表达数据库，为从分子水平阐明小麦抗叶锈病机制 奠定基础。【方法】对叶锈菌诱导的TcLr19 小麦叶片cDNA 文库随机测序，利用BLASTx 对所得序列进行功能注释， 按照Bevan的植物基因功能分类标准进行分类。采用RT-PCR技术，以 Actin 为参照，对2条信号转导相关基因和 3条抗病与防御相关基因进行表达分析。【结果】随机对cDNA文库中756个阳性克隆测序，获得649条高质量EST。 对 EST 序列聚类拼接获得 472 条非重复序列（Unisequence）。功能分类结果表明，25.2%为未知功能蛋白，21.0% 与能量代谢基因相关，17.8%与抗病防御基因及信号转导基因相关，其余EST分别与转录、转运、蛋白代谢等功能 基因相关。RT-PCR分析结果表明同一基因在叶锈菌侵染后不同时间点的小麦叶片中表达量不一致，且各基因有不 同的表达模式。【结论】推测钙转运 ATP 酶，谷胱甘肽-S-转移酶，蛋白激酶 Pti1，NBS-LRR 抗病蛋白和分子伴侣 DnaJ 等参与了小麦与叶锈菌的非亲和互作过程。该 cDNA 文库可用于了解小麦与叶锈菌非亲和互作过程中的功能 基因，为建立研究病原菌基因及小麦抗病基因数据库奠定基础。 关键词：小麦；叶锈菌；cDNA文库；表达序列标签 Analysis of Expression Sequence Tags During Incompatible Interaction Between Leaf Rust (Puccinia triticina) and TcLr19 Using a cDNA Library 1,2 1,3 1 1 1 CHEN Yu-ting , CHEN Yun-fang , LI Shu-feng , YANG Wen-xiang , LIU Da-qun 1 ( Department of Plant Pathology, Agricultural University of Hebei / Biological Control Center of Plant Diseases and Plant Pests of Hebei Province / National Engineering Research Center for Agriculture in Northern Mountainous Areas, Baoding 071001, Hebei; 2Shanghai Entry-Exit Inspection and Quarantine Burea