小麦逆境胁迫相关基因Ta14S的克隆及表达分析.pdfVIP

中国农业科学 2012,45(6):1226-1234 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2012.06.022 小麦逆境胁迫相关基因 Ta14S 的克隆及表达分析 任江萍，刘海伦，王新国，牛洪斌，李永春，王 翔，陈 新，尹 钧 （河南农业大学/ 国家小麦工程技术研究中心，郑州 450002 ） 摘要：【目的】克隆与逆境胁迫相关的基因，通过对目的基因的表达分析进一步解析植物的抗逆机制，为小 麦抗逆育种提供候选基因和理论依据。【方法】基于 cDNA 芯片数据获得的水分胁迫诱导上调表达基因 EST 序列， 运用RACE技术进行cDNA全长克隆，采用生物信息学软件分析克隆基因的编码蛋白特性，并利用实时荧光定量PCR 分析该基因在不同组织及不同胁迫处理条件下的表达模式。【结果】通过RACE扩增获得小麦cDNA全长序列（GenBank 登录号：JN650603），命名为Ta14S。该基因序列全长为1 056 bp，其中，5′端非编码区11 bp，3′端非编码区253 bp，开放阅读框为792 bp，编码263个氨基酸。序列比对发现其蛋白质序列包含1 个蛋白激酶C 的底物结构域、 1 个类膜蛋白结合域、1 个转录因子结合域和 1 个核输出信号结合域，具有植物 14-3-3 蛋白的结构特征；运用实 时荧光定量 PCR 进行Ta14S 表达分析，该基因在小麦苗期根中表达量最高，在 PEG 和低温胁迫的任何时间点均稳 定上调表达，在 ABA 和高温胁迫的 6 h 内其相对表达量均显著高于对照，推测 Ta14S 可能参与小麦 ABA 信号通路 中对逆境胁迫的抗性反应。【结论】获得小麦Ta14S 的全长 cDNA 序列，其编码蛋白包含与蛋白质互作的典型功能 域；通过对 Ta14S 在干旱、高温、低温、ABA 胁迫过程中的表达特性分析表明，Ta14S 在小麦逆境胁迫中发挥着重 要的调控功能。 关键词：小麦；14-3-3蛋白；逆境胁迫；表达 Cloning and Expression Analysis of A Stress-related Ta14S Gene from Wheat REN Jiang-ping, LIU Hai-lun, WANG Xin-guo, NIU Hong-bin, LI Yong-chun, WANG Xiang, CHEN Xin, YIN Jun (Henan Agricultural University/National Engineering Research Centre for Wheat, Zhengzhou 450002) Abstract: 【Objective 】In this study, the objective is to clone the stress resistance-related genes, and analyze the expression pattern of those genes which aim to investigate the underlying molecular mechanism of stress resistance and provide candidate genes for stress-resistance plant breeding. 【Method 】 Based on the analysis of up-regulated EST obtained by cDNA chip, a full-length cDNA sequence was cloned from wheat through rapid amplification of cDNA ends (RACE) method and