小麦大龄幼胚再生性能改进与农杆菌转化.pdfVIP

中国农业科学 2011,44(2):225-232 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2011.02.001 小麦大龄幼胚再生性能改进与农杆菌转化 1,2,3 1 1 1 1 1 石珍源 ，殷桂香 ，杜丽璞 ，陶莉丽 ，徐惠君 ，叶兴国 1 （中国农业科学院作物科学研究所/ 国家基因资源与遗传改良重大科学工程/农业部作物遗传育种重点开放实验室，北京 100081 ； 2 3 北方民族大学生命科学与生物工程学院，银川 750021 ； 中国水稻研究所，杭州 310006 ） 摘要：【目的】小麦幼胚再生率与幼胚大小关系密切，改进小麦大龄幼胚再生性能促进小麦转基因研究。【方 法】以18个普通小麦基因型和5个硬粒小麦基因型为材料，对其开花授粉后15—17 d的大龄幼胚进行破碎处理、 组织培养和农杆菌转化，对转化后的幼胚组织和获得的抗性再生植株分别进行组织化学染色检测和PCR检测。【结 果】大龄幼胚培养2 d后破碎处理的再生率为18.2%，显著高于完整胚对照（1.7%），培养2 d后进行破碎处理的 再生效果高于4和6 d后破碎处理；不同基因型小麦大龄幼胚破碎处理后再生率为16.9%—46.7%，其中，Bobwhite 和中8423大龄幼胚再生率达到了40%以上；大龄幼胚破碎后在弱光条件下培养，再生率进一步提高，较对照（完 整胚黑暗培养）提高 5.4%—47.4%；农杆菌侵染后 GUS 瞬时表达率为 0—76.7%，其中科农 199 高达 76.7%，其次 为Verry（64.4%）和Alondra（47.2%）；经PCR检测，农杆菌转化小麦大龄破碎幼胚获得了候选转基因植株。【结 论】破碎处理和弱光培养显著提高了小麦大龄幼胚再生率，比对照提高5—10倍；科农199、Verry和Alondra 大 龄幼胚对农杆菌侵染比较敏感，适宜作为农杆菌转化的受体材料；农杆菌转化小麦大龄幼胚可以获得转基因植株。 关键词：小麦；大龄幼胚；破碎处理；植株再生；农杆菌转化 Plant Regeneration and Agrobacterium-mediated Transformation Using Large Immature Embryos of Wheat 1,2,3 1 1 1 1 1 SHI Zhen-yuan , YIN Gui-xiang , DU Li-pu , TAO Li-li , XU Hui-jun , YE Xing-guo 1 ( Institute of Crop Sciences, Chinese Academy of Agricultural Sciences/National Key Facility of Crop Gene Resources and Genetic Improvement/Key Laboratory of Crop Genetics and Breeding, Ministry of Agriculture, Beijing 100081; 2College of Life Sciences and Biology Engineering, North University for Ethnics, Yinchuan 750021; 3China Na