中国马铃薯疮痂菌的鉴定及其致病相关基因nec1的克隆和表达.pdfVIP

摘要 马铃薯疮痂病(Potatoscab)主要由植物病原链霉菌(Streptomycesspp．)引起，在世 界各马铃薯种植区均有发生。该病主要危害马铃薯块茎，可在其表面形成痂状病斑， 严重影响薯块的品质，使之市场竞争力降低，从而造成经济损失。引起该病的病原 菌还可侵染多种其它块茎类作物，如甜菜、萝h、胡萝h等。近年来，马铃薯疮痂 病在我国很多马铃薯生产地区相继发生，并有逐年加重的趋势，但目前尚未见该病 病原及致病机制的详细研究报道，因此本文就此方面对我国马铃薯疮痂病进行了较 系统研究。 本研究从我国黑龙江、内蒙古、河北、山东、山西、陕西、甘肃、四川、贵州、 云南等10个省r区)采集了马铃薯疮痂病薯．发现我国的马铃薯疮痂病斑主要表现为 凸起状、凹陷状和平状三类病斑，且病斑具有一定的区域特点。自不同地区的马铃 薯疮痂病斑上分离到80株链霉菌菌株，通过盆栽接种试验、小薯片法和萝h幼苗 检测法对菌株进行致病性检测，发现其中30株具有致病性；采用的3种致病性检 测方法的结果相一致，说明小薯片法和萝h幼苗检测法适于对分离自马铃薯疮痂病 斑的链霉菌进行致病性检测，具有省时省力、结果重复性好等优点。 rDNA序列和ITS序列特点相结合的方法对马铃薯疮痂 采用生物学特性、16S 病菌进行了鉴定，结果表明造成我国马铃薯疮痂病的病原菌至少有三种，分别为s scabies、S acidiscabies和一个待定种。其中我国的S 标准菌株ATCC49173的16SrDNA序列同源性为100％，ITS序列相似性为99，7％， 但二者在生物学特性上存在差异，表现为我国的菌株不能以甘露醇为单一碳源，对 10 acidiscabies标准菌 IU／mL青霉素不敏感；我国的Sacidiscabies菌株与美国的S 株ATCC49003的16S 的生物学差异为我国的菌株能以棉子糖为单一碳源，对苯酚(O．1％)和结晶紫(O．5 “g／mL)敏感；另有一种病原链霉菌与所知的链霉菌种均不能归为一类，将其暂命名 chiniscabies。 为Streptomyces 研究中发现，除Sacidiscabies菌株外，其它致病菌株均能产生硫化氢，并建 。 议将其作为Racidiscabies菌株的鉴定指标之 本文对我国马铃薯疮痂病菌产生的毒索进行了研究。对分离到的链霉菌菌株进 行产毒分析，发现致病菌株均能产生毒素，而非致病菌株均未见毒素产生。对毒素 的活性检测结果表明，毒素能使小薯片和萝h幼苗产生与病菌作用相似的症状，说 明毒素在疮痂病菌的侵染过程中起着主要作用。利用硅胶G．60薄板层析(TLc)和高 压液相色谱(HPLC)技术对毒素进行纯化，发现不同菌株产生的毒素在纯化后活性基 本相同，晚明为同类物质，纯化后的毒索在甲醇和氯仿溶液中为桔黄色液体，性质 较稳定。 本文还扩增到 个与致病性相关的基因nec]，将该基因与表达载体plJ702连接 并转化非致病链霉菌slividaiTSTK24，发现含有该基因的转化子可表现出与致病菌 株相似的致病作用，说明段基因与菌株的致病性紧密相关：但在转化子的发酵液中 未能提取出毒素，说明毒素的合成可能还需其它的基因协同作用。遗传学特征分析 游有多个起始密码子，并含有一个与编码转座酶的基因同源性很高的ORF。 关键谰：马铃薯疮痂病；链霉菌；鉴定；毒素；转化子；necl基因 Identificationofthe ofPotatoScabin and and Pathogens ChinaCloning ofthe Geneneel Pathogenicity·related Expression Ph．D Candidate：Zhao W