依维菌素免疫学测技术研究.pdfVIP

崔恒华：依维菌素免疫学检测技术研究 中文摘要 抗寄生虫和节肢动物活性，是天然杀虫素阿维菌素结构改造产物，为阿维菌素族 农药中的一员。近年来广泛用于农业中防治茄瓜类、叶菜类等重要害虫，具有很 好的杀虫效果。由于其在蔬菜内残留量低．水溶解性小，仪器检测的灵敏度难以 达到要求。免疫学检测技术是对农药及其代谢物的重要的快速分析方法，其具有 灵敏度高、特异性强、方便快捷，有着仪器检测无可比拟的优势。本文利用依维 菌素单克隆抗体进行了免疫学检测技术的研究，主要内容包括IVM半抗原的设计， 人工抗原合成，单克隆抗体制备和相应的依维菌素ELISA检测方法的建立，取得 结果如下： 1，半抗原的改造和人工抗原的合成：用琥珀酸酐法对依维菌素C5位羟基进行化 学改造，合成了半抗原IVM．5．琥珀酰半酯，再用碳化二亚胺法将其与载体蛋白 (BSA、0VA)偶联制备人工抗原。 2．依维菌素单克隆抗体的制备：以1VM一5一琥珀酰半酯与BSA的偶联物免疫 选、亚克隆、ELISA方法检测获得产生阳性抗体的杂交瘤细胞株486，抗体初步鉴 定为IgG球蛋白。再通过体外接种经产多代的Balb／c小鼠，获得高效价的腹水单 克隆抗体，效价高达512，000。 3．利用间接竞争ELISA方法建立依维菌素的免疫检测方法：最佳工作条件优化 后，包被原稀释800倍，腹水单克隆抗体稀释40000倍，溶解分析物的缓冲液中 添加的促溶有机溶剂为10％甲醇。建立的依维菌素CI—ELISA检测线性检测范围在 类似物阿维菌素BI的交叉反应率为51％，与米比菌素肟化物的交叉反应率小于0．2 ％。并将依维菌素ELISA检测方法进行了实样检测的初步应用，在蔬菜中添加依 T 扬州大学硕士论文 维菌素0-400ng／ml，回收率为90％．105％，变异系数为2．1％．12．6％。 以上结果表明，制备的依维菌素单克隆抗体灵敏度高，适用于依维菌素的残 留检测，且筛选出的阳性杂交瘤细胞可以作为构建阿维菌素族农药噬菌体抗体库 抗体可变区基因后通过噬菌体表面展示技术构建一个能筛选多种抗体的阿维菌素 族农药抗体库，这在国内农药免疫检测领域有着开创性的意义。 关键词：依维菌素；半抗原；单克隆抗体；ELISA II 崔恒华：依维菌素免疫学检测技术研究 Abstract Ivermectinis a whichisthereduction semi-syntheticmaerolide·compound and has derivativeofavermectin．Anditisactive helminthes against arthropods．Itgood tokillSO andmelon ofitslowresiduein effect on vegetables crops，Because manypests and in isdifficultfor todetect the low vegetables solubilitywater,it apparatus ivermectinin isan toolfor anddetectionof hi曲level．Immunoassayimportantanalysis andits